纳米技术 外泌体形貌和尺寸测量 原子力显微术 编制说明.pdf

纳米技术外泌体形貌和尺寸测量

原子力显微术

Nanotechnology—Testmethodformorphologyandsizeofexosomes—Atomic

forcemicroscopy

编制说明

1.工作简况

1.1任务来源

本任务来源于国家标准化管理委员会标准制定项目，项目编T-491。

本标准的承担单位为纳米技术及应用国家工程研究中心、国家纳米科学中心、上海交通

大学、上海健康医学院、国纳之星(上海)纳米科技发展有限公司、中国科学院苏州纳米技术

与纳米仿生研究所、江苏集萃中科纳米科技有限公司、苏州赛赋新药技术服务有限责任公司、

常州南京大学高新技术研究院、诺赛联合（北京）生物医药科技有限公司、中国人民解放军

总医院医学创新研究部、宁波希诺赛生物科技有限公司、重庆黔江武陵山生物医药联合研究

院、山东水发生命科学研究有限公司、上海栖瑞生物医学技术有限公司、深圳汇芯生物医疗

科技有限公司。

1.2制定背景

外泌体是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小膜泡，是细胞外囊泡的一种重要类型。

具有脂质双层膜，直径大约为30-150nm。外泌体广泛存在并分布于各种体液中，携带和传

递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并

与多种疾病的发生与进程密切相关。当前，外泌体的研究主要包含了外泌体的生物发生、生

物学功能以及分离、鉴定和应用等。其中，分离和鉴定外泌体是研究和应用外泌体的基础。

然而，由于细胞外囊泡固有的复杂的生物发生以及它们在大小、组成和起源上的巨大异质性，

其研究仍然具有很高的挑战性。有必要建立标准化的方法来解决细胞外囊泡的异质性和细胞

外囊泡研究中分析前和分析多样性的来源。

但是与其他众多技术发展规律类似，细胞外囊泡技术的研究大大超过了其标准的研究。

以分析和定量外泌体的检测技术为例，其主要包括扫描电子显微镜、透射电子显微镜、原子

力显微镜、酶联免疫吸附测定、动态光散射、纳米颗粒跟踪分析以及微流体技术等。其中，

在外泌体的形貌观察中，电子显微镜因分辨率高、成像稳定，非常适合进行外泌体双层囊膜

超微结构观测。但这种方法成像条件苛刻、通量低，更为严重的是电子显微镜必须在真空环

境下操作，而生物体离不开体液也不能在真空中存活。本项目的检测方法利用AFM可以针

对纳米尺度下活体状态外泌体进行原位探测，从而实现了溶液环境下单个活体状态外泌体的

高分辨率形貌成像及机械特性同步测量。目前AFM相关国家标准涉及氧化石墨烯/二硫化钼

片层材料/纳米薄膜的厚度、纳米颗粒尺寸、氮化镓单晶衬底及溅射薄膜粗糙度、脱氧核苷酸

制品形貌、原子力显微镜亚纳米高度测量校准，仅有一项涉及活细胞检测。AFM发展用于

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生命科学的检测技术标准仍具有一定挑战性，特别测量方法是否规范、测量结果是否真实、

可比性如何、量值是否统一等问题仍然亟待解决，迫切需要通过技术标准化来解决。

AFM的工作模式根据样品和探针尖端之间的接触方式分为三种，即接触模式、非接触

模式和轻敲模式。在轻敲模式中探针尖端与样品接触，可以获得稳定的高分辨率图像。但由

于接触是短暂的，对样品的损害大大降低，因此这种模式适用于成像生物分子。因此，为了

填补检测活体状态下外泌体的形貌特征检测的国家标准空白，本方法以液相为介质，采用

AFM的轻敲模式，研究外泌体不破坏不收缩的测量方案，确定不同生物来源、不同形貌结

构、不同介质微环境外泌体的标准化测量条件，最终形成外泌体活体状态的测量技术国家标

准。本文件的实施将使外泌体测量方法标准化，有助于规范我国的此类测量工作，提高测量

准确度，确保国家标准的先进性和实用性，促进我国AFM测量技术的进步。

1.3起草过程

接受工作任务后，主编单位组织编制组认真学习了标准的制订方法，分析了制订《纳米

技术液相轻敲模式测量外泌体形貌的方法原子力显微术》的基本要素及工作程序。通过调

研和咨询，编制组于2022年1月起草了《纳米技术液相轻敲模式测量外泌体形貌的方法

原子力显微术》国家标准制订工作开题报告，并在全国纳米技术标准化技术委员会上海纳米

技术工作组的指导下，组织有关单位和检测分析人员进行了开题论证，确定