生物化学12323245183学习课件.pptx

;掌握DNA的半保留复及DNA复制的起点与方向

掌握原核细胞DNA的复制

熟悉真核生物DNA复制特点

掌握反转录作用及DNA损伤的修复

了解细菌的限制修饰系统;;;;一、DNA的半保留复制;DNA复制的可能方式;DNA半保留复制图示：;半保留复制的证明：;复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图;DNA的半保留复制的生物学意义：;双向复制;复制中的DNA;DNA复制的主要方式;DNA复制的主要方式;三、原核细胞DNA的复制(DNA指导下的DNA合成);原核细胞DNA的复制(DNA指导下的DNA合成);（1）5??3?聚合酶功能（但持续合成DNA的能力差）；

（2）3??5’外切酶活性（对双链无作用，在正常聚合条件下，此活性不能作用于生长链，只作用于生长中不配对的单链，校对功能。）；;（3）还具有5??3’外切酶活性（双链有效）；;ArthurKornberg1918;2、DNA聚合酶Ⅱ和DNA聚合酶Ⅲ：;DNA聚合酶Ⅲ:多亚基酶，含十种亚基:

（αβγθτδδ’χΨε），其中（αεθ）称为核心酶，β2称为夹子，（γ2δδ’χΨ）组成γ复合物，其主要功能是帮助β亚基夹住DNA，故称为夹子装配器，该酶DNA合成的持续能力强，主要与该结构有关。另外，该酶合成速度大，活性高，缺失时大肠杆菌因DNA复制抑制而致死。因此认为该酶DNA的真正复制酶。;DNA聚合酶Ⅲ的异二聚体;DNA聚合酶Ⅲ的β-钳子俯视图;;3、双链DNA复制的分子机制;(1)冈崎片段和半不连续复制;冈崎片段和半不连续复制;(2)冈崎片段的RNA引物;引物合成酶与引发前体;引发体可以沿模板链5’?3’方向移动,具有识别合成起始位点的功能，移动到一定位置上即可引发RNA引物的合成。移动和引发均需要ATP提供能量，n’蛋白具有ATP酶的活力。引发体的移动与复制叉移动的方向相同，与冈崎片段的合成方向相反。;(3)DNA连接酶：连接DNA双链中的单链切口;(4)母本DNA双链的分离

;拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接。作用是松解负超螺旋，反应不需要能量。主要集中在活性转录区，同转录有关。;;解螺旋酶（解链酶）;(5).DNA复制的精确性（高保真复制）;1、碱基的配对规律：模板链与新生链之间的碱基配对保证碱基配错几率约为1/104～1/105。

2、DNA聚合酶的3’→5’外切酶活性的校对功能，使碱基??错配几率又降低100～1000倍。

3、DNA的损伤修复系统。;;参与DNA复制的酶与蛋白因子总览图;小结:DNA的复制过程：（以大肠杆菌为例）;复制原点oriC和原点的识别：;复制原点oriC和原点的识别：;;;链的延长（冈崎片段的合成）;DNA链的延伸;冈崎片段引物的切除、缺口的填补和切口的连接:;前导链和滞后链的合成（DNA聚合酶的异二聚体催化）;;复制的终止;大肠杆菌DNA

复制的终止;四、真核生物DNA复制的特点;4、真核生物染色体在全部复制完之前起点不再重新开始复制；而在快速生长的原核生物染色体DNA复制中，起点可以连续发动复制。真核生物快速生长时，往往采用更多的复制起点使总体复制速度比原核生物更快。;真核DNA复制特点;7、RPA：真核生物的单链结合蛋白；RNaseH1和MF-1切除RNA引物，DNA聚合酶ε填补缺口。;;;五、反转录作用（reversetranscription）;;以前病毒形式整合到宿主细胞DNA中而使细胞恶性转化单链病毒RNARNA-DNA杂交分子双链DNA（前病毒）;

核糖核酸酶H的活性，专一水解RNA-DNA杂交分子中的RNA，可沿5’?3’方向起核酸外切酶的作用；

无校对功能，错误率高，易产生变异。;;cDNA：反义DNA几乎所有真核生物mRNA分子的3‘末端都有一段polyA,当加入寡聚dT作为引物时，mRNA就可作为模板，在逆转录酶催化下在体外合成与该mRNA互补的DNA，称为cDNA。;1983年,发现人类免疫缺陷病毒(humanimmunedeficiencevirus,HIV),感染T淋巴细胞后即杀死细胞,造成宿主机体免疫系统损伤,引起艾滋病(acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS)，该病毒为逆转录病毒。;因发现逆转录病毒的遗传物质而获1975年诺贝尔奖的三位科学家;六、DNA损伤的修复;DNA突变：DNA的核苷酸顺序永久性的改变称为DNA的突变。其主要形式有：

1.点突变：DNA分子中一个碱基对替代另一个碱基对称为点的突变。

2.插入作用：DNA分子中插入一个或几个碱基称为插入作用。

3.缺失作用：DNA分子中缺失一个或多个碱基对称为缺失作