草莓中鞣花酸含量的测定 超高效液相色谱质谱法（征求意见稿）.docx

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草莓中鞣花酸含量的测定超高效液相色谱-质谱法

1范围

本文件确定了草莓中游离鞣花酸含量的超高效液相色谱-质谱联用测定方法。

本文件适用于草莓鲜果中游离鞣花酸含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经提取后进样，采用超高效液相色谱-质谱联用仪分离测定，根据保留时间定性，外标法定量。

5试剂或材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1甲醇

色谱纯。

5.2甲酸

色谱纯。

5.30.1%甲酸水溶液

在100mL水加入0.1mL甲酸（5.2），混合均匀。

5.4提取液

甲醇：0.1%甲酸水溶液（80:20，体积比）：将80mL甲醇（5.1）加入到20mL0.1%甲酸水（5.3）中，混合均匀。

5.5标准品

2

鞣花酸（Ellagicacid，CAS号476-66-4，分子式C14H6O8，相对分子质量302.28），纯度均≥99%。

5.6标准储备液（1000μg/mL）

准确称取鞣花酸标准品10mg（准确至0.1mg），于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，现用现配。

5.7标准工作液

分别吸取标准储备液（5.6）0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于10mL容量瓶中，用提取液（5.4）定容至刻度，配制成浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500.0μg/mL的标准系列工作液，现用现配。

6仪器设备

6.1超高效液相色谱-质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3高速离心机，转速≥4000r/min。

6.4匀浆机。

6.5微孔滤膜：孔径0.22μm。

7样品处理

称取匀浆待测样品2.00g，置于50mL离心管中。加入50.0mL提取液（5.4），全自动均质器提取1min，加入1.5g醋酸钠和6g无水硫酸镁，剧烈振荡2min，混匀后以10000r/min离心3min。取2mL上清液置于装有150mg无水硫酸镁、25mgPSA和2.5mgGCB的离心管，涡旋1min，以10000r/min离心3min。取上清液过0.22μm滤膜至样品瓶，上机测定。

8检测方法

8.1色谱条件

8.1.1色谱柱：T3柱（100mm×2.1mm×1.8μm），或性能相当。

8.1.2流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱条件见表1；

8.1.3流速：0.2mL/min。

8.1.4色谱柱：T3柱（100mm×2.1mm×1.8μm），或性能相当。

8.1.5柱温：40℃。

表1梯度洗脱条件

时间/min

A/%

B/%

0

95

5

0.25

95

5

7.80

0

100

8.50

0

100

8.51

95

5

10.00

95

5

3

8.2质谱条件

8.2.1电喷雾离子源负离子模式（ESI-）。

8.2.2毛细管电压：1kV。

8.2.3离子源温度：450℃。

8.2.4气帘气流量：30L/hr。

8.2.5雾化气流量：900L/Hr。

8.2.6扫描方式：MRM，离子对信息见表2。

表2标准物质的MRM信息

名称

保留时间/min

母离子

子离子

锥孔电压/V

碰撞能/eV

鞣花酸

6.46

301

284*

18

25

229

18

25

145

18

30

8.3校准曲线的制作

将校准系列工作液按浓度由低到高的顺序分别注入超高效液相色谱质谱仪，测定相应的峰面积，以校准曲线工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。

8.4试样溶液的测定

将试样溶液注入超高效液相色谱质谱仪，以保留时间定性，得到峰面积，根据校准曲线得到待测液中鞣花酸的质量浓度。

8.5定性和定量

8.5.1定性

8.5.1.1保留时间

被测试样中鞣花酸色谱峰的保留时间与标准物质色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。

8.5.1.2离子丰度比

在相同实验