色谱的定性与定量.ppt

例：准确称取一定质量的色谱纯对二甲苯、甲苯、苯及仲丁醇，混合后稀释，采用氢焰检测器，定量进样并测量各物质所对应的峰面积，数据如下：物质苯仲丁醇甲苯对二甲苯m/μg0.47200.63250.81490.4547A/cm22.603.404.102.20以仲丁醇为标准，计算各物质的相对质量校正因子。第30页，共51页，星期日，2025年，2月5日第31页，共51页，星期日，2025年，2月5日（二）定量方法1.归一化法★定义：把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法称为归一化法，是一种相对定量方法。★前提：样品中的所有组分都能流出色谱柱，而且在检测器上所有的组分都能产生信号。计算方法：第32页，共51页，星期日，2025年，2月5日★优点：归一化法很直观，容易接受，计算简便、准确，当操作条件如进样量、流速等发生变化时，对计算结果的影响很小，是一种常用的计算方法★缺点：校正因子的测定比较麻烦，必需所有组分都出峰★注意：▼主要用于GC的定量测定，当fi相近时，可直接用峰面积归一化法。▼由于检测技术的影响,HPLC中很少使用归一化第33页，共51页，星期日，2025年，2月5日2、内标法内标法：选择适宜的物质作为待测组分的参比物，定量加到样品中去，根据待测组分和参比物在检测器上的响应值之比和参比物加入量进行定量分析的方法。第34页，共51页，星期日，2025年，2月5日键：选择合适的内标物内标物的选择原则：A、内标物必须是原样品中不存在的物质，其性质尽量与待测组分相近(同系物、异构体)B、内标物不能和被测组分起化学反应，要能完全溶于被测样品中；C、内标物的峰尽可能接近待测组分的峰，或位于几个待测组分的中间，但必须和样品中的所有峰完全分离；D、内标物的加入量应和待测组分相近。第35页，共51页，星期日，2025年，2月5日待测组分(i)的量mi为：设样品的总量为m，则待测组分i的质量分数为第36页，共51页，星期日，2025年，2月5日第1页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、色谱的定性分析1、利用保留值定性鉴别每个色谱峰通过比较保留值(通常是保留时间)的方法，找到各色谱峰所对应的组份大多数情况下用比较保留时间来定性 即所谓：保留时间相同，可能是同样的组份保留时间不同，肯定不是同样的组份第2页，共51页，星期日，2025年，2月5日（1）气相色谱中用保留值定性的方法①利用已知物直接对照进行定性分析通常做法：把未知物和已知标准物在同一根色谱柱上，用相同的色谱操作条件进行分析，记录色谱图后利用保留时间进行比对为避免载气流速和温度变化引起保留时间的变化，可用相对保留值定性或用已知物增加峰高法定性第3页，共51页，星期日，2025年，2月5日已知物增加峰高法定性原理：在得到未知样品的色谱图后，往未知样品中加入一定量的已知物质，在同样色谱条件下的两色谱图对比图谱比较峰高。第4页，共51页，星期日，2025年，2月5日②利用相对保留值定性定义：相对保留值是组分i与基准物S的调整保留值之比：优点：可以消除某些操作条件的影响，只要柱温、固定相不变，即使柱径、柱长、填充情况及流动相的流速有所变化，相对保留值γ仍然不变，它是色谱定性分析的重要参数第5页，共51页，星期日，2025年，2月5日③利用保留指数定性表示物质在固定液上的保留行为，是目前使用最广泛并被国际上所公认的定性参数，它具有定性可靠，重现性好，标准统一等优点。可将储存在计算机中的标准保留指数转换成用户色谱条件下的保留指数和保留时间（tR）第6页，共51页，星期日，2025年，2月5日（A）定义（B）保留指数的测定保留指数的准确度和重现性都很好，用同一色谱柱测定误差小于1%，因此只要柱温和固定液相同，就可以用文献上发表的保留指数定性。第7页，共51页，星期日，2025年，2月5日（2）液相色谱中用保留值定性的方法保留值定性的主要方法★直接与已知标准物对照★某一未知峰和已知标准物的保留值完全相同—可能是★改变色谱柱或流动相，保留时间仍完全相同—基本是第8页，共51页，星期日，2025年，2月5日利用文献的数据进行对比和定性