医学科研方法课件.ppt

临床流行病学分组时应注意的问题*分组只能在同质的基础上进行。*进行数量分组时，当尚不了解被研究对象的变化规律时，宁可先分细一些。*分组时应尽量注意科研的习惯性。*数量分组的界限要清楚。临床流行病学材料的取舍可能出现的问题*实验结果获得了预期效果，能够说明原来的假说；*实验结果基本上完成了假说中的项目和指标，但不够完整、充分；临床流行病学（３）国内外的研究概括起来已形成两大理论。第一是高糖造成的“可逆性代谢障碍”，第二是“高糖造成的不可逆的代谢障碍”。目前的理论仅能解释为什麽患糖网病时周细胞增殖活力降低以及高糖记忆性损伤作用，但不能解释为什麽在临床上快速控制血糖可引起或加剧糖网病的发展。临床流行病学（４）本实验室最新的结果表明糖的波动可引起周细胞死亡，而不是持续高糖引起周细胞死亡。另一方面，周细胞凋亡的程度与原高糖的程度和时间密切相关。更重要的是，我们使用蛋白合成抑制剂和生长因子的作用，可大大延缓周细胞凋亡的过程，展现了逆转周细胞死亡和治疗糖网病的前景。临床流行病学2、研究目标、内容、拟解决的关键问题研究目的：阐明血糖波动引起选择性周细胞凋亡的生物化学和分子生物学机制，通过调控周细胞凋亡的程序并用内皮细胞存活进行对比研究，探索防治早期糖网病的方法。临床流行病学研究内容和拟解决的关键问题（１）高糖所造成的代谢紊乱是如何决定周细胞必然要进入凋亡程序，而在相同条件下为什么内皮细胞却得以存活（２）比较周细胞与内皮细胞中多种信息传递通路和凋亡相关基因表达，从而解释选择性周细胞凋亡。临床流行病学主要拟检测：细胞内Ca2+的变化蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶A(PKA)的活性。PKC异构酶的表达凋亡抑制基因BC1-2，凋亡激活基因bax,肿瘤抑制基因P53和C-mycmRNA表达和它们的蛋白产物临床流行病学控制糖浓度的波动，调控相应信息传递通路和凋亡相关基因是防止周细胞死亡的方法。合理地、缓慢地控制糖水平的升降通过上述信息传递通路的调控，达到防止周细胞病变目的临床流行病学3、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案、可行性分析视网膜毛细血管周细胞和内皮细胞培养，按过去实验方法进行周细胞与内皮细胞复合培养（见附表）细胞凋亡的形态学和生物化学指标按过去方法NAD+和ATP测定按Grant和Ericson法临床流行病学胞内钙浓度按过去方法PKC活性和异构酶的测定按Inoguch和King法。cAMP—依赖性PKA按Kammer法凋亡相关基因bc1—2、bax，P53和c-myc将用RT-PCR方法进行。临床流行病学⑨bc1-2，bax，蛋白水平将用酶标法测定，抗血清可由Bection，DickmsonLab.购到以上实验方法在本实验室均已成熟，且周细胞、内皮细胞存活的病理模型已经建立。本实验室有良好的设备，估计可以按计划完成。临床流行病学4、创新之处首次建立了糖尿病条件下选择性周细胞死亡的病理模型，提出并验证了周细胞死亡方式是凋亡。第一次提出了“血糖波动”比“持续性高糖”对周细胞存活具有更大的危害。本课题一改过去国内外20余年只注意高糖毒副作用的研究方向。临床流行病学本课题是周细胞与内皮细胞的比较性研究，包括两种细胞复合培养。首次提出用调控血糖，调控凋亡相关的信息传递通路和凋亡相关基因表达等方法揭示临床治疗早期糖网的前景。临床流行病学5、度研究计划、预期进展预计用三年时间完成在高糖条件下二种细胞内的醛糖还原酶被激活，糖基化终末产物形成，同时NAD+，ATP水平、DNA链裂水平和DNA蛋白交联水平发生变化，但变化程度可能不同，这些将作为判断细胞“命运”的指标。糖浓度骤然波动可能造成胞内Ca2+浓度升高，有可能激活一系列Ca2+依赖型酶的活性。临床流行病学与细胞死亡和细胞增殖相关的PKC和PKA，是相互对立，又相互关联的信息传递道路，糖骤然波动后两种细胞内PKC、PKA通路的状况可能与细胞存活或死亡有关。凋亡相关基因的表达和产物的水平----Bc1-2/Bax蛋白的比例在两种细胞中可能不同，通常Bc1-2/Bax比例高细胞不会死亡，我们预计根据Bc1-2/Bax比例可以解释为什么一种细胞存活而另一种细胞尚可存活的现象。临床流行病学在上述(1)-(4)的各种条件下，使用信使(Ca2+、PKC、PKA)抑制剂或激活剂，使用蛋白合成抑制剂，RNA合成抑制剂以及生长因子，为“体外疗法”，同时观察上述指标，判断“体外疗法”治疗周细胞凋亡的效果。临床流行病学医学论文撰写医学论文是以医学科学及与之有关的现代科