3.2基因工程的基本操作程序第2课时课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第三章基因工程第2节基因工程的基本操作程序人教版·选择性必修3

基因表达载体的构建

获得目的基因后直接转入受体吗？

不是，游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，就算可以进行转录和翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂进行复制，导致子代细胞不再含有目的基因。获得目的基因后直接转入受体吗？基因表达载体的构建是基因工程的核心工作。

使目的基因在受体细胞中稳定存在且遗传给下一代;使目的基因在受体细胞中能够表达且发挥作用。1、基因表达载体的作用

质粒标记基因复制原点启动子终止子限制酶切位点位于基因的上游，紧挨转录起始位点，是RNA聚合酶识别和结合的部位，具有驱动基因转录的作用。位于基因下游，使转录在所需的地方停止下来。供目的基因插入载体中便于重组DNA的筛选能够在受体细胞中自我复制或整合到受体DNA上2、基因表达载体的组成

3.基因表达载体构建的流程同种限制酶或产生相同黏性末端的限制酶切割DNA连接酶目的基因限制酶切割位点获取目的基因限制酶切割位点质粒重组DNA分子限制酶限制酶

限制酶限制酶DNA连接酶质粒重组DNA分子目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。3.基因表达载体构建的流程

图解限制酶的选择原则(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。(2)保留标记基因(一般不全破坏)、启动子、终止子、复制原点原则：所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。(3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中PstⅠ；为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。基因表达载体的构建(核心)

1.区分启动子和起始密码子,终止子和终止密码子启动子和终止子位于DNA上，是基因表达载体必需的部分，而起始密码子和终止密码子位于mRNA上，决定翻译的开始和结束。2.区分载体、表达载体、重组质粒载体≠表达载体二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。

补充知识：基因结构-----原核生物基因编码区上游编码区下游启动子终止子①功能：不能转录为相应的mRNA，不能编码蛋白质的区段，调控遗传信息的表达。能转录相应的mRNA，进一步编码（翻译）出蛋白质的DNA区段。编码区：非编码区：②组成：编码区上游与编码区下游。上游有启动子，下游有终止子。编码区非编码区非编码区基因RNA聚合酶识别和结合位点，驱动转录终止转录

补充知识：基因结构-----原核生物基因编码区上游编码区下游启动子终止子编码区非编码区非编码区AGGTCACGTCGATCGTCCAGTGCAGCTAGCRNA聚合酶AGGUCACGUCGAUCG转录mRNA翻译多肽链

补充知识：基因结构-----真核生物基因编码区上游编码区下游启动子终止子编码区非编码区非编码区内含子外显子编码区：非编码区：外显子：内含子：能转录相应的mRNA，进一步能编码蛋白质的DNA序列。能转录相应的mRNA，但却不能编码蛋白质的DNA序列。真核生物基因中的非编码序列：包括非编码区和内含子基因不编码蛋白质,能调控遗传信息表达

补充知识：基因结构-----真核生物基因编码区上游编码区下游启动子终止子编码区非编码区非编码区RNA聚合酶转录mRNA前体加工（剪切、拼接）成熟mRNA翻译多肽链真核细胞的一个基因的编码区转录出mRNA前体，需把其中的内含子切除，外显子拼接成成熟mRNA。

补充知识：基因结构-----真核生物基因编码区上游编码区下游启动子终止子编码区非编码区非编码区转录mRNA前体加工（剪切、拼接）成熟mRNADNA聚合酶逆转录酶逆转录复制单链DNAcDNA不含非编码序列。即不含非编码区和内含子

基因通常是有遗传效应的DNA片段原核细胞真核细胞不同点编码区是的编码区是间隔的、的相同点都有能够编码蛋白质的和具有调控作用的区组成的连续不连续编码区非编码非编码序列=非编码区原核基因：非编码序列真核基因：=非编码区+内含子

成熟mRNA相应酶去除内含子转录翻译真核基因：编码区（外显子+内含子）多肽链前体mRNA蛋白质加工如果把一个真核生物的基因导入原核细胞中表达，一定会产生原来的蛋白质吗？提示：一般不能产生原来的蛋白质原因：①原核生物细胞里没有相应的酶来去除内含子；②原核生物没有真核的蛋白质加工系统（如内质网、高尔基体等）

提取如果把真