细胞分离技术.ppt

*三、离心过滤 1）离心过滤的原理以离心力作为推动力完成过滤操作,具有离心和过滤的双重作用。2）影响离心过滤速度的因素过滤面积和离心力第23页，共65页，星期日，2025年，2月5日*离心过滤机可分离固体密度大于或小于液体密度的悬浮液。可分为:连续式离心机和间歇式离心机。第24页，共65页，星期日，2025年，2月5日*第二节细胞破碎细胞破碎：指选用物理，化学，酶或机械的方法来破坏细胞壁或细胞膜。第25页，共65页，星期日，2025年，2月5日*一、细胞壁结构细胞壁化学组成非常复杂,取决于微生物类型细胞的年龄细胞的生长生理学多糖，脂质，蛋白质在三维结构上的排列方式第26页，共65页，星期日，2025年，2月5日*细胞壁的结构第27页，共65页，星期日，2025年，2月5日*二、细胞破碎率破碎率：被破碎细胞的数量占原始细胞数量的百分数。1）直接记数法2）间接记数法第28页，共65页，星期日，2025年，2月5日*1）直接记数法平板计数技术需时长；只有活细胞才能计数；会产生误差血球细胞器上用显微镜计数快速而简单，但细胞小计数困难第29页，共65页，星期日，2025年，2月5日*2）间接记数法在细胞破碎后，测定悬浮液中细胞释放出来的化合物的量（如可溶性蛋白，酶等）。将破碎后的细胞悬液离心去掉固体（完整细胞和碎片），然后对上清液进行含量或活性分析。酶活性是破碎程度的很好指示参数。第30页，共65页，星期日，2025年，2月5日*三、细胞破碎的方法破碎方法机械法非机械法固体剪切作用液体剪切作用珠磨法压榨法高压匀浆超声破碎酶溶法化学法物理法第31页，共65页，星期日，2025年，2月5日*1）珠磨法（图3-6）作用机理：微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混匀，珠子之间及珠子与细胞之间相互剪切、碰撞，促使细胞壁破裂，释放出内含物。第32页，共65页，星期日，2025年，2月5日*影响因素：①转盘转速：破碎比速度与转盘速度成正比。②细胞浓度：最佳浓度应由实验确定。浓度大，产生的热量大，但单位细胞重量所消耗的功率小。③珠粒大小：在一定范围内，磨珠越小，破碎速度越快，但也不能过小。第33页，共65页，星期日，2025年，2月5日*④温度：将温度控制在5～40℃对破碎物影响较小。⑤流量：流量大，加工单位质量细胞消耗的能量减小，但细胞的破碎程度和蛋白质的释放量会降低。第34页，共65页，星期日，2025年，2月5日*温控与能耗珠磨机是采用夹套冷却的方式实现温度控制的，一般情况下能将温度控制在要求的范围内；珠磨机的能耗与细胞破碎率成正比；高的破碎率会提高分离的成本。第35页，共65页，星期日，2025年，2月5日*2)高压匀浆法（图3-8）作用机理从高压室压出的细胞悬浮液，经过阀座的中心孔道从阀座和阀杆之间的小环隙中喷出，速度可达几百米每秒。这种高速喷出的悬液又射击到静止的碰撞环上，被迫改变方向从出口管流出。第36页，共65页，星期日，2025年，2月5日*温控与能耗活性物质在破碎过程中的失活问题。蛋白质和酶的失活主要由匀浆过程中产生的热引起。如果能将温度控制在35oC以下，酶失活的损失可以忽略。提高压力有利于细胞破碎，但需增加能耗。机械破碎的能耗主要包括提供动力消耗的能量及低温操作消耗的能量。第37页，共65页，星期日，2025年，2月5日*3)超声波法作用机理声频高于15～20KHz的超声波在高强度声能输入可以引起空化现象，使气泡形成、胀大和破碎的现象。第38页，共65页，星期日，2025年，2月5日*此法多适用于微生物材料、细胞培养材料的破碎；因超声波处理时产热较多，故应用此法时，需要采取降温措施；另外，某些核酸及酶对超声波敏感，慎用此法。第39页，共65页，星期日，2025年，2月5日*超声波破碎过程效率的影响因素：①声频②声能③处理时间④细胞浓度⑤菌种类型第40页，共65页，星期日，2025年，2月5日*四)化学渗透法用化学药品改变细胞壁或膜的通透性，从而使内含物有选择地渗透出来，这种处理方式称为化学渗透法。作用机理化学渗透取决于化学试剂的类型及细胞壁和膜的结构与组成。不同试剂对各种微生物细胞作用的部位和方式有所差异。第41页，共65页，星期日，2025年，2月5日*有机溶剂（苯、甲苯）表面活性剂有些动物细胞，例如肿