1640和DMEM的配制方法.pdf

RPMI1640细胞培养液的配制

1)配制培养基最好使用新制备的三蒸水。一般在试验前当天或前一天制备为好。调节p

H值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。

2)制备培养基的器皿清洗要绝对干净，烤干后备用（滤器、滤膜、量筒、移液管及盛

放培养基的小瓶等存放和转移培养基液体的器具都应进行灭菌）。

3)溶解培养基：将干粉培养基溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，倒入培

养液中。振荡或超声助溶，一般不要加热助溶。

4)补加试剂：根据包装袋说明和试验需要加入NaHCO（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸钠、3

HEPES等其他试剂。

5)加抗生素：一般抗生素终浓度为――青霉素100U/ml，链霉素100U/ml。市售青霉素

为80万U／瓶，可溶于4ml体积，每一升培养液中加0.5ml即可。市售链霉素为100万U

／瓶，可溶于5ml体积，每一升培养液中也加0.5ml即可。无链霉素的情况下，用庆大霉素

代替，终浓度调为50～200U/ml。

6)调pH值：加水到900ml（在需要加10％小牛血清的情况下），然后用5％NaHCO3

调节pH到7.2。

7)过滤除菌：宜采用0.45um和0.22um滤膜各一张，上层为0.45um，下层为0.22um，

以保证过滤效果。注意滤膜正面（光面）朝上。过滤后分装于小瓶中（100或200ml）。

8)加小牛血清：根据培养基配制的量将小牛血清分装，冷冻保存（－20℃）。临用前

将加入小牛血清(10%~20%)。

【注意事项】

每次配液时，需要的其他辅助性液体（Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）

也可以同时配制，分别过滤。

市售小牛血清使用前都应该灭活（56℃，30min），以消除补体活性。动物血清个体差

异大，故而每一批血清都进行严格检测，同时进行无菌试验。优质血清应该为淡黄色，透明，

无溶血，无沉淀，灭活后颜色稍深。生化检测总蛋白含量3.5~4.5g/100ml，球蛋白不高于2

g／100ml。选定一个效果较好的批号后，可一次多购该批号的血清，保证试验条件的稳定。

由于市售小牛血清pH未知，但大多偏酸。试验中加入小牛血清后，培养基的pH可能

还会变化，故亦可先加入小牛血清后调pH值。但此种方法过滤较困难，只适于正压过滤。

培养液配好后，应先抽取少许放入培养瓶内，于37℃温箱内置24～48hr，以检测培养

液是否有污染。

每次配液量以两周左右为宜，一次配液不要太多，防止营养成分（主要为谷氨酰胺）损失，

造成实验繁琐或者污染。

细胞培养基DMEM的配制（初学）

2010.07.02

细胞培养基是由合成培养和小牛血清配制而成。合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长

的需要按一定配方制成的粉状物质。其主要成分是氨基酸、纤维素、碳水化合物、无机离子

和其它辅助物质。它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。小牛血清含有一定的营养成

分，更重要的是它含有细胞生长所必须的生长因子、激素、贴附因子等，这是合成培养基无

法替代的。此外它还能中和有毒物质的毒性。故一般体外培养细胞时要加入一定量的小牛血

清（１0%）。

【仪器、材料和试剂】

1．仪器：蠕动泵1套，滤器，高压蒸汽灭菌锅，磁力搅拌器，pH计。

2．材料：3000mL锥形瓶，250mL或500mL培养液瓶，0.22mm的微孔滤膜。

3．试剂：双蒸水，小牛血清，合成培养基（DMEM），NaHCO。

3

【操作步骤】

1．过滤器的准备和安装

（1）清洗好过滤器，干燥

（2）将一张0.22mm的微孔滤膜在DDW中浸泡后放入滤器，注意不要有气泡。

（3）用布或报纸包装好，121℃30min进行高压蒸汽灭菌处理。

（4）在超净台内安装好过滤装置，准备过滤。

2．合成培养基的配制

DMEM13.5g

NaHCO33.7g

HEPES2.38g

DDW溶解

10M的NaOH调pH为7.5

定容1L

(1)将干粉型培养基DMED溶于300ml的三蒸水中，再用300ml水冲洗包装内面两次，

倒入培养液中，以保证所有干粉都溶解成培养液。

(