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;显微技术
细胞别离技术
细胞培养技术
细胞组分的分级别离
细胞示踪技术
细胞分子生物学技术;一、显微镜技术microscopy
μm微米=10-6m
nm纳米=10-9m
?埃=10-10m
(一)光学显微镜技术
利用光线照明,将微小
物体形成放大影像的
仪器
;1.显微镜的分辨率
显微镜或人眼在25cm的明视距离处,能分辨
被检物体微细结构最小间隔的能力。
d=
光学显微镜的分辨极限0.2μm;100μm;2.光镜标本切片的制备
(1)固定
定义：将组织浸入化学试剂中，通过在细
胞中大分子间形成交联，保持细胞
中原有结构的形态和位置的过程。
固定的目的：
A防止组织自溶或腐败
B保持细胞原有的形态
C保持细胞各种成分的原有位置
常用固定剂：乙醇、甲醛、戊二醛;(2)脱水
定义：借助某些化学溶剂置换组织内水分的过程。
常用的脱水剂：酒精
(3)包埋
定义：将组织块包入包埋剂使组织硬化的过程。
常用的包埋剂：液体石蜡、树脂
(4)切片
1-10μm
;〔5〕染色
采用某些化学物质特异性或选择性地与细
胞内的某些成分相互作用，从而原位显示
细胞某种成分或结构的方法
A选择性染色
考马斯亮蓝–蛋白质Brachet反响
;hematoxylin-eosin;B特异性染色
酶+底物
抗原+抗体;3.荧光显微镜技术
(1)原理
荧光分子在受到光照射后，可吸收特定波
长的短波光线，并发射出比原来吸收波长
更长的光
;〔2〕荧光显微镜的根本构造
A紫外光光源
B二向色镜：反射短波光线，透过长波光线
C滤光片;〔3〕常用的荧光染料
A有机染料
荧光素
罗丹明
FITC;B量子点quantumdot
Ⅱ-Ⅵ族、Ⅲ-Ⅴ族元素构成的半导体纳米结晶
良好的光学稳定性
抗光漂白性
;;〔4〕应用
A免疫荧光显微技术
〔Immunofluorescencemicroscopy〕
抗体+荧光染料
;B绿色荧光蛋白GFP
;4.相差显微镜〔phasecontrastmicroscope〕
(1)原理
波长颜色
振幅亮度
速度相位
;(2)应用
活体细胞观察;5.激光扫描共焦显微镜
〔LaserScanningConfocalMicroscope〕
(1)原理
在显微镜根底上配置激光光源，扫描装置，
共轭聚焦装置和检测系统而形成的显微镜。;〔2〕应用
A细胞的三维重建
B细胞定量荧光检测
DNARNA蛋白质含量
C细胞内Ca2+pH动态检测
D细胞间通讯;果蝇胚胎原肠胚;〔二〕电子显微镜技术
利用电子与固体样品作用时所发出的信息,
对样品进行微区观察和分析的技术
亚显微结构
超微结构
1.电子显微镜的特点
高分辨率
理论上d=0.002nm
实际上d=0.1nm
生物标本d=2nm
高放大倍率1,000,000;;(2)超薄切片的制备
A固定戊二醛:蛋白质
锇酸:C=C(膜结构)
;B脱水上升梯度
乙醇：30%50%70%80%90%95%100%
C包埋单体树脂加温聚合
D切片500–700?
;NADP酶反响;2.扫描电子显微镜
〔Scanningelectronmicros
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