培养基灭菌的目的和要求.pptVIP

培养基的物理状态01固体培养基的灭菌时间比液体培养基的灭菌时间长。其原因是液体培养基灭菌时，热的传递有对流和传导，固体培养基只有传导。对于含有少量大颗粒及粗纤维的培养基的灭菌，需提高灭菌温度，且在不影响培养基质量的条件下，采用粗过滤方法预先处理，以防培养基结块而造成灭菌的不彻底。023、pH培养基的pH越低，灭菌所需时间越短。培养基的pH与灭菌时间的关系见表。01020304微生物细胞含水量越多，蛋白质的凝固温度越低，越容易受热凝固而丧失生命活力。5、微生物细胞含水量老龄细胞对不良环境的抵抗力比幼龄细胞强，后者易被杀死。6、微生物细胞菌龄微生物数量越多，所需灭菌时间越长。4、培养基的微生物数量：细菌的营养体、酵母、霉菌的菌丝体对热较为敏感，放线菌、酵母、霉菌孢子比营养细胞的抗热性强，细菌芽孢的抗热性最强。7、微生物的耐热性空气排出情况蒸汽灭菌过程中，温度的控制是通过控制罐内的蒸汽压力来实现。压力表显示的压力应与罐内蒸汽压力相对应，即压力表的压力所对应的温度应是罐内的实际温度。如果罐内空气排除不完全，压力表所显示的压力就不单是罐内蒸汽压力，还包括了空气分压，因此，此时罐内的实际温度就低于压力表显示压力所对应的温度，以致造成灭菌温度不够而灭菌不彻底。搅拌：有助于传质和传热。泡沫泡沫中的空气形成隔层，使热量难以传递，不易达到微生物的致死温度，导致灭菌不彻底。泡沫的形成主要是由于进汽排汽不均衡，如果在灭菌过程突然减少进汽或加大排汽，则会出现大量泡沫，对易发泡沫的培养基应加消泡剂以减少泡沫量。2.连续灭菌流程连续灭菌优点：（1）提高产量；（2）产品质量较易控制；（3）蒸汽负荷均衡，锅炉利用率高，操作方便；（4）适宜采用自动控制；（5）降低劳动强度。实际操作：高温灭菌时间约为15~30s，然后根据发酵类型不同在维持罐维持8~25min。**动画**动画*动画*动画目的：杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。要求：达到要求的无菌程度(杂菌污染降低到被处理的每1000罐中只残留1个活菌的程度,10-3个/罐）；尽量减少营养成分的破坏。12培养基灭菌的目的和要求在灭菌过程中，培养基组分的破坏是由两个基本类型的反应引起的：培养基中不同营养成分间的相互作用；对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。灭菌的方法化学法化学药品灭菌法：甲醛、苯酚等物理法干热灭菌法湿热灭菌法（生物工程工业常用方法）射线灭菌法湿热灭菌的原理：主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质，如酶等，发生凝固、变性，从而导致微生物无法生存而死亡。致死温度与致死时间：杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。1.湿热灭菌原理和影响灭菌的因素微生物的热阻和相对热阻：前者是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。后者是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。各种微生物对湿热的相对热阻微生物相对热阻营养细胞和酵母1.0细菌芽孢3×106霉菌孢子2~10病毒和噬菌体1~5某些微生物的相对热阻灭菌方式大肠杆菌霉菌孢子细菌芽孢噬菌体或病毒干热灭菌12-1010001湿热灭菌12-103×1051-5苯酚11-21×10930甲醛12-102502紫外线15-1002-55-10蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒；蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底；蒸汽有很大的潜热；操作方便，易管理。湿热灭菌的优点将培养基中的杂菌总数N0杀灭到可以接受的总数N（10-3），需要多高的温度、多长的时间为合理。灭菌温度和时间的确定取决于：杂菌孢子的热灭死动力学反应器的形式和操作方式培养基中有效成分受热破坏的可接受范围1.1湿热灭菌的理论基础微生物的热死灭动力学方程：对数残留定律微生物营养细胞的均相热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学，即：N-任一时刻的活细菌浓度，个/L；t-时间，min；K-比热死速率常数，min-1，越小越耐热12细菌孢子的热死灭动力学与营养细胞的有所不同。它表现为非对数的死亡动力学。但当温度超过120?C时，热阻极强的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的热杀灭动力学也接近对数死亡动力学即符合一级反应规律。取边界条件t0=0，N=N0，对上式积分得或为理论灭菌时间的对数残留规律公式。问题：能不能做到绝