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实验八凯氏定氮法测定样品中粗蛋白的含量掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法。学会使用凯氏定氮仪。一、实验目的二、实验原理1.消化：有机物中的胺根在强热和CuSO4/K2SO4，浓H2SO4作用下，消化生成（NH4）2SO4；2NH3+H2S04+2H+(NH4)2S042.蒸馏：在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中；(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3(NH4)2B4O7+5H2O
滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3实验原理三、实验器材豆浆粉浓硫酸混合催化剂：CuSO4/K2SO4=0.4/6混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液200ml与0.1%甲烯蓝乙醇溶液50ml混合NaOH:40%2%硼酸溶液0.01N标准盐酸溶液精密称取豆浆粉1.0g，移入干燥消化管中，加入混合催化剂6.4g，摇匀后再加入15ml浓硫酸和两颗玻璃珠，放入消化炉中消化。起始电压150V，消化1h后，观察消化管内泡沫变化，泡沫消失后，加强火力到220V，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下消化管放冷，小心加蒸馏水至50ml，混匀备用。取与处理样品相同量的混合催化剂按同一方法做试剂空白试验。消化四、实验步骤四、实验步骤蒸馏装好蒸馏装置，如图：在蒸气发生烧瓶中加约70颗玻璃珠，2/3体积的蒸馏水，加入4~5滴浓硫酸及4~5滴混合指示剂。01沿小漏斗加入蒸馏水约20mL到反应室，留半漏斗水，保持水封，防止漏气。01加热产生蒸气后，立即关闭废液排放管上的开关，蒸气进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。01洗涤蒸馏装置四、实验步骤01从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，停止加热。02冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接硅胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到蒸汽收集器中，打开废液排出口夹子放出废液。四、实验步骤向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2滴，并使冷凝管的下端插入液面下吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室，并以5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内。将10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室，立即加半漏斗水水封以防漏气，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，从指示剂开始变色时计时，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。蒸馏样品四、实验步骤
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