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浅析五色糯米饭中6种合成着色剂检测方法

人工合成着色剂大多以萘、苯、甲苯等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成[1],有的含有β-萘胺和α-氨基萘酚等致癌物，过多食用会危害人体健康。五色糯米饭是壮族地区的传统风味小吃，因糯米饭呈黑、红、黄、白、紫5种色彩而得名，又称“乌饭”[2]。每逢农历三月三节日前后，广西各族(尤其是壮族)人民都要制作食用五色糯米饭，这一风味美食与祭祖娱神活动融合在一起，充满着民族、地方情趣。饱含植物清香的五色糯米饭十分诱人，看之色泽鲜艳、五彩缤纷；食之清香弥漫、沁人心脾，其不仅美观美味，还具有滋补等一定的保健作用，深受广西壮家人的喜爱，被看作吉祥如意、五谷丰登的象征。面对如此色鲜味美的食物，是否会有商家违规使用添加剂?市民能否放心食用?针对这个问题，本研究开展了五色糯米饭专项风险监测工作。目前，《食品中合成着色剂的测定》 (GB/T5009.35—2016)采用聚酰胺吸附法测定合成着色剂，操作较为烦琐、耗时，且主要适用于酒类、汽水类、糖类、蜜饯类等食品[3]。五色糯米饭与标准适用的这些食品有所不同，其含有大量的淀粉等天然水溶性成分，这些成分由于容易吸附着色剂而干扰测定[4-6],所以该方法不太适用于五色糯米饭等成品粮中合成色素的测定。因此，本研究采用最大吸收波长检测的方法，操作简单省时，灵敏度和准确度均得以提高，对五色糯米饭中合成着色剂的测定可靠、实用。

1材料及测定方法

1.1仪器与试剂耗材

1.1.1仪器

超高效液相色谱仪(WatersAcquityUPLCH-Class),PDA检测器；十万分之一电子天平(梅特勒-托利多XS205DU);超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);离心机(Sigama)。

1.1.2试剂耗材

(1)乙酸铵溶液(0.02mol/L);柠檬酸溶液；甲醇-甲酸溶液(6+4);氨水；乙醇一氨水溶液。

(2)OASISWAX柱(6cc/150mg)固相萃取柱。

1.1.3标准品

取胭脂红、苋菜红、新红、柠檬黄、日落黄、亮蓝标准溶液，浓度均为1000μg·mL-1,混合并稀释成不同浓度的标准曲线溶液。

1.2色谱条件

资生堂MGⅢ-C18,直径x长度(mm):(2.0×150)mm;PDA检测器，检测波长(柠檬黄430nm,新红、

苋菜红、胭脂红、日落黄520nm,亮蓝625nm);流动相，以乙腈为B、以0.02mol·L-1乙酸铵溶液为A,进行梯度洗脱(0~4min:A96%～80%;4~7min:A80%～5%;7~10min:A5%～96%);流速：0.5mL·min-1;柱温30℃;进样量10μL。

1.3样品预处理

称取5.000g(精确至0.001g)粉碎样品，置于50mL刻度离心管中，加入乙醇-氨溶液10mL,涡旋5min,5

000rpm离心5min,将上清液过滤，残渣再重复提取1次，合并上清液作为样品溶液。将样品溶液置于预处理过的固

相萃取柱中，待试样全部流出，依次用5mL10%甲酸甲酯溶液、5mL水清洗，弃去全部流出液，再用5mL25%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，置50℃浓缩至近干，用水溶解并定容至25mL,经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液上机分析。

1.4测定法

精密吸取标准曲线溶液和样品提取液各10μL,注入超高效液相色谱仪测定。

2结果与分析

2.1波长选取

GB5009.35—2016方法中采用254nm的波长进行测定，存在很多杂峰，往往会干扰目标物质的检测。本研究针对各合成着色剂标准品溶液，用紫外一可见分光光度计进行光谱扫描，发现目标物质在可见光范围内有更大的吸收值，最终确定6种合成着色剂(胭脂红、苋菜红、新红、柠檬黄、日落黄、亮蓝),检测波长如表1所示。同时，6种合成着色剂标准溶液在3个波长通道(430、520、625nm)的色谱图，如图1所示。

图1合成着色剂色谱图

2.2检出限的确定

在最低浓度标准溶液液相色谱图中，按3倍信噪比浓度作为检出限。采用本方法处理，6种合成着色剂在不同波长测定时的检出限见表2。

由表2可以看出，在多波长下测定的检出限，均较254nm单波长下要低，尤其是亮蓝。由此可见，本研究设定的波长可以用来测定这6种合成色素，有效提高检测灵敏度。

2.3标准曲线绘制

将标准溶液分别稀释为0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0