血小板血型系统.ppt

方法学评价简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想应用范围广，可用于检测血小板抗原抗体以及交叉配合试验；可开展大量样本的检测工作及研究工作固相化的血小板及指示细胞能长期保存备用不需要特殊的仪器设备，易于推广第30页，共80页，星期日，2025年，2月5日3.单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验

(Monoclonalantibody-specificimmobilizationofplateletantigensassay,MAIPA)第31页，共80页，星期日，2025年，2月5日原理在血小板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠抗人血小板抗体，裂解血小板后，把裂解产物移至包被的羊抗鼠IgG微孔板内，通过辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG检测人的血小板同种抗体第32页，共80页，星期日，2025年，2月5日单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验第33页，共80页，星期日，2025年，2月5日方法学评价优点：敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量抗原（HPA-5）、低频率抗原。缺点：在未知抗原检测时必须使用一组单克隆抗体，而又不能对所有糖蛋白具有活性如果人抗体与单克隆抗体和同一个抗原决定簇反应，就会引起假阴性结果第34页，共80页，星期日，2025年，2月5日4.改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验

(ModifiedantigencaptureELISA,MACE)第35页，共80页，星期日，2025年，2月5日原理血小板与抗体致敏，将形成的抗原-抗体复合物分别加入包被有抗GPIb、GPIIb、GPIIIa、GPIX、HLA等鼠抗人单克隆抗体的微孔内，再加入酶标羊抗人IgG底物显色，终止反应后测405nm吸光度第36页，共80页，星期日，2025年，2月5日方法学评价及应用优点：特异性较高缺点：非特异的物质和某些血清中的IgG结合非常牢固应用：对于已经去除了HPA-1a的大量标本的定型常使用竞争性ELISA技术第37页，共80页，星期日，2025年，2月5日5.流式细胞仪检测技术

(Flowcytometry,FCM)第38页，共80页，星期日，2025年，2月5日原理免疫荧光标记技术，抗原抗体结合同一激光光源激发得到特异荧光色细胞体积、结构、荧光种类及性质等多种参数分析第39页，共80页，星期日，2025年，2月5日FCM检测血小板相关抗体第40页，共80页，星期日，2025年，2月5日6.微柱凝胶血小板定型试验

（microcolumegeltestforplatelettyping）第41页，共80页，星期日，2025年，2月5日原理向微柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示红细胞阳性结果：若待检血清中存在血小板抗体，则形成血小板-血小板抗体-抗IgG-指示红细胞四位一体的免疫复合物不能通过凝胶柱阴性结果：若待检血清无血小板抗体，则不能形成免疫复合物，指示红细胞离心后沉于柱底第42页，共80页，星期日，2025年，2月5日第43页，共80页，星期日，2025年，2月5日第44页，共80页，星期日，2025年，2月5日第45页，共80页，星期日，2025年，2月5日第46页，共80页，星期日，2025年，2月5日第47页，共80页，星期日，2025年，2月5日方法学评价方法快速、敏感、操作简单操作标准化（试剂、设备、工作程序）标本试剂用量少结果判断客观准确结果保存时间长（数天或数周）安全：减少医源性传播第48页，共80页，星期日，2025年，2月5日（二）分子生物学检测22个HPA抗原中除HPA-14bw基因外，其它所有HPA基因多态性都表现为SNP（单核苷酸多态性），因此检测SNP的方法基本上适用于HPA基因分型共同特点：以聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）为基础，所不同的只是在于PCR引物设计以及检测PCR产物的方法第49页，共80页，星期日，2025年，2月5日方法PCR-SSP:首选，最简单常用，快速经济PCR-RFLP:繁琐，无法对HPA-4基因分型PCR-ASO:繁琐，不太容易判断结果SSCP：不适合常规HPA检查DNA序列分析法:操作复杂，成本较高第50页，共80页，星期日，2025年，2月5日第51页，共80页，星期日，2025年，2月5日（三）血清学检测与分子生物学检测的关系血清学检测简单、快速成本低主要用于血小板抗体检测和交叉试验血型抗原的血清学定型是基因分型的前提第52页，共80页，星期日，2025年，2