海洋种质资源的保存.pptxVIP

第九章种质资源的保存

(1)概论

(2)掌握大型藻类的纯种保存方法

(3)掌握海洋微型生物的冷冻保存方法

(4)了解海洋动物生殖细胞的冷冻研究现状，并掌握其保存方法

目录

*大型藻类纯种保存方法

*海洋动物生殖细胞的冷冻保存

*海洋微型生物的冷冻保存

种质资源保存是指利用天然或人工创造

的适宜环境保存种质资源，使个体中所包含的遗传物质保持其遗传完整性和活力，并能通过繁殖将其遗传特性传递下去。

概念

种质是指亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。

(

存在问题分析

米遗传背景清楚的纯系实验生物尚未开发

出来。之所以如此，海洋生物在放在人工管理条件下，进行饲育和繁殖困难程

度大、经济成本高和保存难度大造成的

*海洋生物学领域，实验材料始终依赖天然生物，纯系实验生物仍未确立，如果作为实验材料，难以保证实验数据的重复性。

低温生物学

*自从1949年Ploge,Smith和Parkes发现甘油在维胞低温保存中有抗冻作用后，对生物细胞和组织的低温冷冻保存研究迅速展开，并形成了一门新兴的学科——低温生物学。低温生物学主要是研究在低温(一般0～-196℃)条件下生物的形态结构生理生化等生命现象的变化规律；以及对细胞、组织、器官乃至整个生物体活性保存的一门边缘学科。发展此项技术的意义在于克服时间和空间的条件限制进行人工繁殖，并且为品系纯化及遗传基因多样性保护提供技术支持。

海青菜”藻体

1℃/min(-40℃)-196℃-40℃~-196℃

约1a

400℃/min

Tris缓冲液+5%DMSO

60

甘紫菜丝状体

(100℃/min)

无记载-85℃

20d

无记载

海水+10%(DMSO+Tris)

0.1

-100℃

-75℃

-20℃

-20℃-196℃

20d1℃/min15~20min250℃/s

海水

半干燥状态

半干燥

(水分约10%)

海水

海水+1.5mol/LDMSO

*引自酒井保次，1991

1)照本(1965)2)右田(1966)3)福原和涉谷(1966)4)右田(1967)5)Saki和Sugawara(1978)6)VanderMer和Simpson(1984)7)Saga(未发表)8)土屋(1989)

海洋植物的冷冻保存

表14.4.1海洋植物的冷冻保存*

无记载

0.02~100℃/min

无记载

5℃/min

缓速(-40℃)

-40~-196℃

(170℃/s)

2℃/min(-40℃)

条斑紫菜

甘紫菜²条斑紫菜)

甘紫菜”条斑紫菜”

1d

10d

218d

记载

记载无记载

海藻类世代器官冷却速度保存温度保存时间融解速度

叶状体

叶状体叶状体

丝状体叶状体

-196℃约4a无记载海水+1.5mol/L

100

55

100

15

100

100

防冻物质及前处理

-40~-196℃即还反

成活率(%)

江篱雌生配子体

VIT⁷/人

DMSO

人工

海澡天世代研日

一、大型海藻种质保存

*海洋藻类的保存工作起始于20世纪初期对海

洋微藻的保护，国际著名的海洋微藻保存机构CCAP、SAG、UTEX、COBRA等主要进行海洋微藻种质资源的保存，其种质保存的数量超过了2000多种，种质收集范围也从早期的区域性海藻种类发展到世界范围内海藻种质采集工作。上述国际海藻种质资源保存主要以微型藻类为主，很少有关大型海藻种质保存的报道，种质保存的方式以细胞继代培养为主，仅CCAP报道了超低温保存。

*中国已经发展和建立了一系列大型海

藻种质资源保存技术，收集和保存了大量具有生产应用价值的海藻遗传资源，为大型海藻的种质保存做出了较为突出的贡献。目前，已经建立低温弱光保存技术、固体保存技术、组织(愈伤)培养、单倍体克隆和超低温保存技术，实现了包括海带、紫菜、裙带菜的种质资源库建设。

*目前大型海藻种质保存技术按照保存温

度可分两大类：传统的低温弱光保存(一般为8-12℃)和以低温(4℃)、冷冻(-40℃)、低温真空冷冻干燥和超低温(-196℃)为主的冷冻保存。

大型海藻种质冷冻保存的方法

骂

低温弱光保存

*传统的低温弱光保存是目前较常用的一种大型海藻种质保存的方法，该方法是在适宜的光照、温度条件下，利用液体培养基保存海藻