3.1重组DNA技术的基本工具课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

普通棉抗虫棉苏云金杆菌Bt抗虫基因普通棉花抗虫棉导入表达提取第3章基因工程

问题1：不同生物的基因为什么能拼接？问题2：外源基因为什么能在受体细胞中表达？相同的碱基互补配对方式相同的复制、转录、翻译方式通用的遗传密码1.绝大多数生物都以DNA为遗传物质2.不同的生物具有相同的遗传分子机制基因工程诞生的理论基础：相同的遗传信息在不同的生物体内表达出相同的蛋白质。基因控制性状DNARNA蛋白质复制转录翻译基因在空间上转移并成功表达

第3章基因工程本节聚焦1.分子手术刀—限制性内切核酸酶2.分子缝合针—DNA连接酶3.分子运输车—载体基因工程概念重组DNA技术的基本工具第1节重组DNA技术的基本工具

基因工程是指按照人们的愿望,通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。生物体外基因DNA分子水平基因重组基因工程育种优点：一、基因工程概念重组DNA技术、基因拼接技术、转基因技术定向改造生物的遗传特性。克服远缘杂交不亲和的障碍（打破生殖隔离）。工程别名：操作环境：操作对象：操作水平：操作原理：

二、重组DNA技术的基本工具1.主要来源：2.种类：3.作用：数千种原核生物EcoRⅠ识别GAATTC序列，在G和A间切开SmaⅠ识别CCCGGG序列，在C和G间切开。识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，断开特定部位的磷酸二酯键。切开的是两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，氢键自动断开。（一）分子手术刀—限制性内切核酸酶（限制酶产生黏性末端或平末端4.作用结果(切割产物)：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。黏性末端平末端5.作用特点：一种限制酶一般只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位置切割DNA分子。专一性：特异性：限制酶只能切割DNA，而不能作用于RNA、蛋白质等物质。

②呈现碱基互补对称，中轴线两侧的碱基反向对称重复排列的，称为回文序列。①大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数4个、8个或其他数量。识别序列特点：拓展：限制酶的名字的由来P72EcoRⅠ：大肠杆菌（Escherichiacoli）R型菌株中分离出的第一个限制酶；SmaⅠ：粘质沙雷氏菌（Serratiamarcescens）中分离出的第一个限制酶。EcoRⅠ种加词头两个字母菌株型号数字表示分离出来的第几种限制酶属名首字母

切割侵入细胞的外源DNA，使之失效，保证自身安全。细菌的DNA分子不具备该限制酶的识别序列；或者限制酶识别序列被甲基化了。1.限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？2.为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？3.请写出下列限制酶切割形成的黏性末端。同种限制酶产生的黏性末端相同。不同的限制酶可能会形成相同的黏性末端。识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。

(二)分子缝合针—DNA连接酶1.作用：2.DNA连接酶种类：种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能特性相同点将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。大肠杆菌T4噬菌体可以连接两种末端，但是连接平末端的效率较低可以连接粘性末端和平末端，但连接平末端的效率低于T4DNA连接酶都恢复被限制酶切开的磷酸二酯键DNA连接酶作用没有特异性。注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的两条单链缺口，但不能连接单链DNA！

DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？都能催化磷酸二酯键形成。DNA聚合酶连接的是游离的脱氧核苷酸，需要模板；DNA连接酶连接的是DNA片段。相同点：不同点：3.几种相关酶的比较名称作用部位作用结果限制酶DNA连接酶DNA聚合酶DNA(水解)酶解旋酶磷酸二酯键碱基对之间的氢键将DNA切成两个片段磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸将双链DNA分子局部解旋为单链

课堂练习1.(2022·天津耀华中学高二期中)以下是几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是A.以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的B.②片段是在识别序列为的限制酶作用下形成的C.①和④两个片段在DNA聚合酶的作用下可形成重组DNA分子D.限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键√

探究?活动：思考2：要想获得目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？要切2个切口，产生4个黏性末端。5353运用限制酶从苏云金杆菌的DNA上提取出Bt基因。思考3：Bt基因是否可以直接导入到棉花细胞（受体细胞）？为什么？否