组织学基本技术.ppt

切片：用于具有一定硬度的组织，例如肝、肾等第23页，共69页，星期日，2025年，2月5日涂片:用于液态组织，如血液，精液和唾液。第24页，共69页，星期日，2025年，2月5日铺片:用于很薄的组织，如肠系膜。第25页，共69页，星期日，2025年，2月5日磨片:用于很坚硬的组织，如骨和牙。第26页，共69页，星期日，2025年，2月5日石蜡切片制作步骤取材固定包埋切片染色封片第27页，共69页，星期日，2025年，2月5日石蜡切片的制备（一）取材注意事项：材料愈新鲜愈好，动作要迅速、准确，防止组织发生变形、自溶；取材所用的刀和剪要锐利，避免损伤组织；取材部位要恰当、准确，易于说明问题；所取组织块大小要恰当，便于固定液的渗透。组织的大小以1X1X0.3cm为宜，厚度一般不超过0.5cm。第28页，共69页，星期日，2025年，2月5日（二）固定目的：使组织内的蛋白质迅速凝固或沉淀，防止细胞自溶或组织腐败，尽量保持组织的原有结构和化学组成。第29页，共69页，星期日，2025年，2月5日单纯固定液4%中性甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制，配制后密封、4℃保存，保存时间不超过一个月。适用HE染色和免疫组化。4%多聚甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制。乙醇混合固定液复合固定液AF（乙醇-甲醛）固定液Bouin固定液Carnoy固定液Zenker固定液固定液的种类第30页，共69页，星期日，2025年，2月5日固定方法浸透固定：将组织切成小块，直接投入固定液中固定。灌注固定：一般采用心脏灌注固定。固定更加迅速、均匀。尤其适用神经组织。第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日固定注意事项及时固定：最好动物死后半小时内固定，一般不超过2小时。固定液选择：根据组织的特点、染色方法选择合适的固定液。固定液的量：一般为组织体积的6-10倍。固定时间：在保存组织形态结构的同时，尽可能较好保存组织细胞的抗原。固定温度：低温可以保持好的结构。第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日高效、方便、快捷的全自动形态检测平台！第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日（三）染色HE染色（hematoxylin-eosinstaining）：组织学最常用的染色方法。特殊染色：硝酸银染色、醛复红染色、甲苯胺蓝染色等。第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日镀银染色神经元H.E染色第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日苏木精碱性染料将嗜碱性物质染成蓝色酸性染料将嗜酸性物质染成红色细胞核中的染色质细胞质中的核糖体多数细胞的细胞质（线粒体、溶酶体、滑面内质网）HE染色嗜碱性嗜酸性伊红第36页，共69页，星期日，2025年，2月5日细胞爬片制作将处理好的盖玻片放入接种了细胞的培养瓶或六孔板内。待细胞生长达到60％以上后取出玻片。用4%的多聚甲醛固定2h以上。可加甘油封存置于零下20℃保存。第37页，共69页，星期日，2025年，2月5日细胞涂片制作离心将细胞收集出来，用预冷的PBS洗2－3遍，最后用PBS将细胞重悬。吸取30－50ul（可根据细胞量调整）滴至处理过的载玻片上，然后涂抹均匀。待稍微风干以后加4％多聚甲醛溶液覆盖细胞，固定2－4小时。在细胞上加一层甘油放-20℃保存。第38页，共69页，星期日，2025年，2月5日组织化学技术概念：应用化学反应或免疫学反应等原理检测组织和细胞的化学成分并进行定位、定量的技术。包括一般组织化学、免疫组织化学、原位杂交组织化学等。四、组织化学与免疫组织化学术第39页，共69页，星期日，2025年，2月5日原理：组织细胞中的物质（核酸、糖类、脂类、蛋白质等）与相应试剂反应，最后形成有色终产物，通过有色终产物在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。特点：能在组织学标本上，定位、定性和定量地显示分布于组织或细胞内某些物质。第40页，共69页，星期日，2025年，2月5日①糖类——过碘酸-Schiff反应（PAS反应）②DNA——福尔根反应（Feulgenreaction）③DNA和RNA——甲基绿-派若宁反应④脂类——脂溶性染料（苏丹红、油红O等）⑤酶类——生化反应（一）一般组织化学术（Histochemistry）第41页，共69页，星期日，2025年，2月5日PAS反应：确定组织或细胞中有