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微生物挑战性实验方法

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业名版本/修1.0

称改号

文微生物挑战性试验操作规范生效日期2010/7/1

件名StandardOperationProcedurefor页第1页共6

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编审批

写核准

1.0目的

新产品防腐效果的测试

2.0范围

公司新产品

3.0参考：

4材料与方法

4.1化妆品中常用的防腐体系[6]

营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、

0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等

4.2微生物挑战性实验

4.2.1受试用微生物

测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。细菌包括:大肠

杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。霉菌包括:黑曲

霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中,于37℃(细菌)或28℃(霉

菌)下培养。细菌培养在2天后,霉菌培养在3-5天后，挑选适量菌落于灭菌的

生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌(1×108个/ml)或混合霉菌悬液(1×107

个/ml),置于4℃贮放备用。

4.2.2一次加菌的28天微生物挑战试验

此方法参照美国药典(第21版)上微生物挑战性

试验检测防腐剂效果的方法。称取各受试样品30g,加入混合细菌或混合霉

菌悬液,每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3×105个霉菌。然后

充分混匀,置于28℃下。在接菌的0、7、14、21和28天取样分析:准确称取

3g样品,加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内,加入27ml灭菌生理盐水,充分震

荡混匀,此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。按

平板倾注法计数受试品中含菌量,细菌培养是37℃下24h～48h，霉菌培养为

28℃下3～5天。此实验用以评判防腐剂的有效与否。评判标准为:当每克样品

中一次接菌(1×106细菌和1×105霉菌)后,在第14天存活菌量减少至不高于

起始浓度的0.1%,以后逐渐减少,在28天为0。符合标准为防腐剂有效(通

过测试),不符合为防腐剂无效(不通过测试)。

分析与检测

4.2.3重复3次加菌的微生物挑战试验此方法参照国际CTFA（国际化

妆品、香精和洗涤剂协会）推荐的微生物挑战性试验。称取受试样品30g,每隔

2周加菌一次(即实验的第1、3和5周),每次加细菌量为1×106～1×107

个/g样品和霉菌1×105个/g～1×106个/g样品。在加菌后的0天、7天和

14天(后一次加菌前)采样分析样品中含菌量,方法同前。此方法可将受检样品

分为三类:

(1)防腐效果优良(W),即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,

存活菌量减少至不高于起始浓度的0.01%(即≤100个/g或ml）样品,通过

测试)。

(2)防腐效