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常规石蜡包埋组织切片（常规切片）的制备

㈠组织块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。

㈡组织切片制备及其苏木精-伊红染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为

易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。

㈢常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间）

1.水洗：用流水冲洗已经固定的组织块30min。

2.脱水（常温下）

（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60～120min

(2)80%乙醇60～120min

(3)95%乙醇Ⅰ60～120min

(4)95%乙醇Ⅱ60～120min

（5）无水乙醇Ⅰ60～120min

（6）无水乙醇Ⅱ60～120min

（7）无水乙醇Ⅲ60min

[注意事项]①未经充分固定的组织不得进入脱水程序。②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5～10倍以上。③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。⑤较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水。⑥组织置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。⑦丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。

3.透明

（1）二甲苯Ⅰ20min

（2）二甲苯Ⅱ20min

（3）二甲苯Ⅲ20min

[注意事项]①二甲苯的容积应为组织块总体积的5～10倍以上。②组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防组织硬、脆），并依不同种类组织及其大小而异；组织呈现棕黄或暗红色透明即可。③二甲苯应及时过滤、更换。④组织经二甲苯深度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。

4.浸蜡

（1）石蜡Ⅰ(45~50℃)60min

（2）石蜡Ⅱ(56~58℃)60min

（3）石蜡Ⅲ(56~58℃)60min

[注意事项]①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70

℃）进行，不得用明火加温。②熔蜡的容积应为组织块总体积的5～10倍以上。③组织块经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程，应尽可能减少将透明后组织块表面的二甲苯带入熔蜡中。④浸蜡时间适宜，过短时浸蜡不充分（组织过软），过长时组织硬脆。⑤熔蜡应及时过滤、更换。

5.包埋

（1）先将熔化的石蜡倾入包埋模具中，再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块，使组织块的最大面或被特别指定处的组织面向下埋入熔蜡中；应将组织块平正地置放于包埋模具底面的中央处；包埋于同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直包埋（立埋）。

（2）将与组织块相关的病理号小条置入包埋模具内熔蜡的一侧。

（3）待包埋模具内的熔蜡表面凝固后，即将模具移入冷水中加速凝固。

（4）从包埋模具中取出凝固的包埋蜡块（简称蜡块），用刀片去除组织块周围的过多石蜡（组织块周围保留1～2mm石蜡为宜）。将包埋蜡块修整成规则的正方形或长方形。

（5）将病历号小条牢固地烙贴在蜡块一侧（编号应清晰可见）。

（6）把修整好的蜡块粘贴在支持器上，以备切片。

（7）使用包埋机的方法按有关厂商的说明书操作。

（8）注意事项

①应将组织块严格分块包埋。包埋时一定要首先认真核对组织块的病理号（包括亚号）、块数和取材医师对包埋面的要求，准确地包入相应的病理号小条。发生包埋差错时，必须立即与取材医师和病理科当班负责人取得联系，及时处置。

②必须严防各种异物污染，勿将无关组织（包括缝线、纸屑或其他异物（尤其是硬质异物）埋入蜡块内。

③包埋过程要操作迅速，以免组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。

④包埋用的熔蜡应纯净，熔点适宜。浸蜡Ⅰ用软蜡（熔点为45~50℃），浸蜡Ⅱ、Ⅲ和包埋用蜡均用硬蜡（熔点为56~58℃）。

⑤包埋用熔蜡使用前应先静置沉淀、过滤。

⑥熔蜡时不得使用明火，以防燃烧。包埋用熔蜡的温度应65℃；包埋用的镊子不可加温过高，以免烫伤组织。

6.切片

（1）切片刀或一次性切片刀片必须锋利。使用切片刀时，必须精心磨损（在低倍显微镜下确认刀刃无缺口）；使用一次性切片刀片时，应及时更新。

（2）载玻片必须洁净、光亮。

（3）将切片刀或刀片安装在持刀座上（以15°为宜）。

（4）将蜡块固定于支持器上，并调整蜡块和刀刃至适当位置（刀刃与蜡块表面呈5°夹角）。

（5）细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座和蜡块支持器。

（6）修块（粗切）：用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块完整地全部切到。每块粗切片的厚度为15～20μm。[注意：对于医嘱再次深切片（特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片），应尽量少修块，以尽量好地获得有关病变的连续性]

（7）调节切片厚度调节器（一般为4~6μm），进行切片