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苏木素-伊红（HE）染色

苏木精-伊红染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。

㈠染色程序

1.石蜡切片苏木精-伊红染色（常规苏木精-伊红染色）

（1）二甲苯Ⅰ5～10min

（2）二甲苯Ⅱ5～10min

（3）无水乙醇Ⅰ1～3min

（4）无水乙醇Ⅱ1～3min

(5)95%乙醇Ⅰ1～3min

(6)95%乙醇Ⅱ1～3min

(7)80%乙醇1min

（8）蒸馏水1min

（9）苏木素液染色5～10min

（10）流水洗去苏木素液1min

(11)1%盐酸-乙醇1～3s

（12）稍水洗1～2s

（13）返蓝（用温水或1%氨水等）5～10s

（14）流水冲洗1～2min

（15）蒸馏水洗1～2min

(16)0.5%伊红液染色1～3min

（17）蒸馏水稍洗1～2s

(18)80%乙醇1～2s

(19)95%乙醇Ⅰ2～3min

(20)95%乙醇Ⅱ2～3min

（21）无水乙醇Ⅰ3～5min

（22）无水乙醇Ⅱ3～5min

（23）石炭酸-二甲苯3～5min

（24）二甲苯Ⅰ3～5min

（25）二甲苯Ⅱ3～5min

（26）二甲苯Ⅲ3～5min

（27）中性树胶封固

注：①(12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。

②(23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。

2.冰冻切片苏木精-伊红染色

（1）冰冻切片固定10～30s

（2）稍水洗1～2s

（3）苏木素液染色（60℃）30～60s

（4）流水洗去苏木素液5～10s

(5)1%盐酸-乙醇1～3s

（6）稍水洗1～2min

（7）返蓝（用温水或1%氨水等）5～10s

（8）流水冲洗15～30s

(9)0.5%伊红液染色1～2min

（10）蒸馏水浸洗1～2min

(11)80%乙醇1～2min

(12)95%乙醇1～2min

（13）无水乙醇Ⅰ1～2min

（14）无水乙醇Ⅱ1～2min

（15）石炭酸-二甲苯2～3min

（16）二甲苯Ⅰ2～3min

（17）二甲苯Ⅱ2～3min

（18）中性树胶封固

注：①(7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。

②(15）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。

㈡染色结果：细胞核呈蓝色，细胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。

㈢染色注意事项

1.切片染色前，应彻底脱蜡。

2.用含有升汞液体固定的组织，其切片染色前应先脱去汞盐：

（1）石蜡切片脱蜡至水洗

(2)Lugol液20min

（3）流水冲洗5min

(4)95%乙醇10min

（5）水洗1min

(6)5%硫代硫酸钠水溶液5min

（7）流水冲洗5min

（8）显微镜观察除汞满意后，转入苏木精-伊红染色

3.脱除福尔马林色素（必要时）：

（1）石蜡切片脱蜡至水洗

(2)1%NaOH(1ml）与80%乙醇（99ml）混合液10min

（3）流水冲洗5min

（4）转入苏木精-伊红染色

4.严格执行苏木精-伊红染色流程，用显微镜控制细胞核的苏木素染色质量。HE染片应着色鲜艳，红、蓝分明，对比清晰。

5.载玻片自二甲苯中取出后，应立即用洁净、光亮的盖玻片和稠度适宜的中性树胶湿封载玻片。封盖处内无气泡，外无溢胶。封片时必须进行操作人员和局部环境的二甲苯污染防护。不应将组织切片烤干或风干后再行封片。

6.必须在载玻片的一端牢贴标签。标签上应印有病理科所在的医院名称。标签上应清楚显示有关的病理号及其亚号；标签上的病理号应准确无误，无涂改。

7.制片完成后，技术人员应对切片与其相应的病理学检查记录单或取材工作记录单认真进行核对；确认无误后，将制备好的切片连同相关的活检申请单/活检记录单以及取材工作单等一并移交给有关的病理医师；交接双方经核对无误后，办理移交签字手续。

8.石蜡切片-苏木精-伊红染色的优良率（甲、乙级切片所占的比率）应≥85%。石蜡切片-苏木精-伊红染色质量的基本标准列于附表。

9.制片工作一般应在取材后2个工作日内完成（不含进行脱钙、脱脂等需要特殊处理的标本）。

10.制片过程出现意外情况时，技术室人员应及时向病理医师和科主任报告，设法予以补救。

附表常规石蜡包埋-苏木精-伊红染色切片质量的基本标准

优质标准满分质量缺陷减分

⒈组织切面完整，10①组织稍不完整：减1～3分②不完整：减4～10分

内镜咬检、穿刺标本切面数10③未达到规定面数：减5分

⒉切片薄（3～5μm），厚薄均匀10①切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6～10分；②厚薄不均匀：减3～5分

⒊切片无刀痕、裂隙、颤痕10①刀痕、裂隙、瘢痕，