高三生物一轮复习课件PCR技术拓展应用.pptx

PCR的应用;;;;;1．实时荧光定量PCR技术检测病毒核酸;√;解析：引物与探针均具有特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则，A正确；

模板DNA含量越高，PCR扩增过程中形成的荧光分子越多，荧光强度越大，即反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关，B错误；

耐高温的DNA聚合酶催化DNA合成的方向总是从子链的5′端到3′端，C正确；

若要用荧光定量PCR技术检测某基因的转录水平，即检测细胞中mRNA的含量，则先要将mRNA逆转录形成DNA再检测，故需要用到逆转录酶，D正确。;典例分析;典例分析;3.(2023·河北唐山一中高三模拟)“实时荧光定量qPCR”是新冠疫情防控的一把利刃，通常在1～2h内即可得到检测结果。Taqman探针是实时荧光定量RT—PCR技术中的一种常用探针(如图1)，其5′端连接荧光基团(R)，3′端连接淬灭剂(Q)。当探针完整时，R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。;(1)结合图1和图2分析，“荧光RT—PCR技

术”所用的试剂盒中通常都应该含有_____

____酶、_____________酶、Taqman探针、引物、dNTP、Mg2＋、缓冲剂等。这种分子;(2)根据Taqman探针功能分析，探针中碱基序列的设计应主要依据______________________

__________________________________________________。新冠病毒是冠状病毒大家庭中新;(3)虽然荧光RT—PCR是当前被广泛认可的检测手段之一，但是不断有“假阴性”现象报道，通过上述过程分析，“假阴性”的可能原因有_____(填字母)。

a.通过咽拭子取样不规范或取样所获样本量不足

b.在样本运输、检测中出现了损坏和污染

c.病毒相应关键序列发生了基因突变;2．PCR定点突变——重叠延伸PCR技术;大引物PCR;重叠延伸PCR;重叠延伸PCR;重叠延伸PCR;重叠延伸PCR;重叠延伸PCR;;2．PCR定点突变——重叠延伸PCR技术;2024南昌一模试题（节选）;2024南昌一模试题（节选）;2024南昌一模试题（节选）;;典例分析;典例分析;2．幽门螺杆菌是一种常见的人类致病菌，其骨架蛋白MreB通过影响脲酶活性而参与调控其致病性。为了更准确地分离出MreB蛋白，用重叠延伸PCR技术(指在PCR的基础上，采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成重叠链，通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠拼接起来的一项技术)将幽门螺杆菌MreB基因中编码终止密码子前的DNA序列与TAP标签(可以标记幽门螺杆菌基因组中任何一个基因，且不会影响基因的表达)进行连接，构建了融合表达蛋白MreB和TAP标签的质粒，实验流程如下图所示。;(1)重组质粒的构建

①为将带有标签的MreB基因定向插入pK18mobsacB质粒中，需要在引物末端添加限制酶识别序列，据图分析，在引物1末端添加的序列所对应的限制酶是________，在引物4末端添加的序列所对应的限制酶是_________。;典例分析;典例分析;典例分析;;;;;;大引物PCR;典例分析;典例分析;典例分析;典例分析;典例分析;典例分析;4．反向PCR扩增已知序列两侧的未知序列

;;反向PCR技术;反向PCR技术;;;5．巢式PCR

首先将目标的DNA模板与第一套引物(外引物)结合。第一套引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片段(图中未显示可能的多种产物)。然后使用第二套引物(内引物)对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部，而非目的片段包含两套引物结合位点的可能性极小，因此第二套引物不可能扩增非目的片段。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。原理如下图所示。;√;解析：两对引物的碱基序列不相同，但均应为单链DNA片段，以便与模板互补配对，A正确；

根据DNA的半保留复制的特点，可知PCR前2次循环产生的四个DNA分子的两条链均不等长，第3次循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸链，即仅含引物之间的序列，因此，至少经过3次循环才能得到图示的第一轮扩增产物，B正确；

由于内引物扩增模板是外引物扩增后的产物，第二轮反应能否进行，也是对第一轮反应正确性的鉴定，如果第一轮扩增产生了错误片段，那么第二轮能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低，C正确；

巢式PCR中加入的组分与常规PCR相同，都含有模板、引物、耐高温的DNA聚合酶、四种游离的脱氧核苷酸、缓冲液、Mg2＋等，第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在内引物的存在下进行第二轮扩增，从而提高反应的特异性，获得的产物特异性更强，D错误。;1.