DB22_T1987-2013_饲料中己烯雌酚的测定液相色谱-质谱_质谱法_吉林省.docxVIP

ICS65.120

B46

DB22

备案号：

吉林省地方标准

DB22/T1987—2013

饲料中己烯雌酚的测定液相色谱-质谱/质

谱法

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T1987—2013

前

言

本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、顺德出入境检验检疫局。

本标准起草人：刘斌、邵秋荣、史艳宇、王宇、王潇、王家旭、石金娥、李滢倩、李媛媛。

I

DB22/T1987—2013

料饲料中己烯雌酚的测定液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了饲料中己烯雌酚含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于饲料中己烯雌酚含量的测定。

本方法检出限为0.01mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

试料用乙腈提取，经阴离子固相萃取柱净化、浓缩后，液相色谱-质谱/质谱（HPLC-MS/MS）测定，

外标法定量。

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682规定一级水的标准。

4.1氢氧化钠（NaOH）。

4.2甲醇(CH3OH)。

4.10己烯雌酚（diethylstilbestrol）标准品：C18H20O2，CAS：56-53-1，纯度≥99.0%。

4.11标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取0.0100g己烯雌酚标准品，用甲醇定容至10.0mL。4℃

条件下避光保存，可使用1个月。

4.12标准工作液：取标准储备液（4.11）用70%甲醇溶液（4.7）稀释，配制成浓度依次为0.05mg/L、

0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的己烯雌酚标准溶液，根据需要用2.0mL适当浓度的

标准溶液溶解空白样品浓缩残渣，配制成相应浓度的标准工作溶液，现用现配。

4.13弱阴离子交换固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者。

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4.14滤膜：0.22μm，有机相。

5仪器和设备

5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。

5.2离心机：转速≥8000r/min。

5.3天平：感量0.0001g。

5.4超声波清洗器：40kHz。

5.5固相萃取装置。

5.6氮吹仪。

6分析步骤

6.1试样制备

选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。

6.2提取

称取5g粉碎试样（精确到0.001g）于50mL离心管中，加入40mL乙腈（4.4），混匀，超声提取

15min，5000r/min离心10min，上清液转移至另一50mL离心管中；残渣中加入10mL乙腈再次提取，

合并两次提取溶液，40℃下旋转蒸发至近干，加5mL氢氧化钠溶液（4.6）溶解残渣，8000r/min离心

5min，取上清液，待净化。

将阴离子固相萃取柱连接于真空固相萃取装置下，先用2mL甲醇（4.2）、2mL水将柱子活化，将

6.2的样品上清液上柱，流速为1mL/min，依次用1mL氨水溶液(4.8)、0.5mL甲醇以3mL/min的流速淋

洗，用4mL甲酸甲醇溶液(4.9)洗脱，流速为1mL/min。收集洗脱液，在40℃下经氮气吹干后，用2mL70%

甲醇溶液（4.7）溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.14），供HPLC-MS/MS测定。

c）雾化气：氮气，0.25MPa；

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f）监测离子：母离子m/z267.1，定量子离子m/z251.1，定性子离子m/z237.1；

g）驻留时间：0.5s；

h）脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到

检测要求；锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最优灵敏度。

6.4.3液相色谱-质谱/质谱测定

6.4.3.1定性测定

各检测目标化合物以保留时间和两对离子（定性离子/定量离子）所对应的LC-MS/MS色谱峰面积相

对丰度进行定性。被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物的保留时间一致，同时被

测试样中目标化合物的定性离子相对丰度与浓度接近的相同条件下得到的标准溶液谱图相比，误差不超

过表1规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。

表1定性确