分子生物学技术在中医药研究中的应用 绪论课件.ppt

分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论2．中医药对基因转录（mRNA）水平调整作用的研究（1）中医药对某个已知基因转录（mRNA）水平调整作用大量的研究表明，中医药对某一个或一组特定基因的作用是明确有效的，常用的方法有Northernblot、RTPCR、实时荧光定量PCR、原位杂交等。分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论（2）中医药对基因转录组调整作用的研究由于中医药是多途径、多靶点作用的特点，因此，近年来，越来越重视中医药基因转录组调控或中医相关证候基因转录组表达特征的研究。常用的研究方法有：cDNAArray、基因芯片（MicroArray）、DDPCR、EST检测等，以及RACEPCR、RNA干扰技术等后续研究工作。分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论3．中医药对蛋白表达水平的调整作用（1）中医药对某一已知蛋白表达水平的调整作用比较常用的方法是ELISA技术、免疫组化和Westernblot等技术。还有单克隆抗体制备技术。（2）中医药对蛋白组表达水平的调整作用蛋白芯片技术，蛋白双向电泳及其后续的质谱技术。分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论4．分子生物学中常用的基本技术（1）基因工程常用技术（2）细胞培养技术（3）DNA提取技术（4）RNA提取技术（5）蛋白提取技术（6）分子生物学信息资源的利用分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论四．本课程的教学安排包括两个方面，而重在基本技术的操作和培训：1）理论介绍性的：如实时荧光定量RTPCR，westernblot；基因芯片（MicroArray）；PCR技术，免疫组化，以及RNA干扰等技术，。2）实验操作训练的：如重组质粒、转化宿主细菌、筛选阳性克隆、扩增细菌、从细菌中制备已扩增了的DNA、利用限制性内切酶切开重组插入的DNA片段和载体、电泳分离插入DNA片段和载体、回收插入并放大的DNA基因片段，以及Northernblot录像。分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论课次课堂讲授实验见习第一次6/14绪论；重组质粒的方法与原理;质粒转化大肠杆菌的方法与原理重组质粒;质粒转化大肠杆菌第二次6/21阳性单菌落扩增与小量质粒DNA制备的方法与原理阳性单菌落扩增与小量质粒DNA制备第三次6/28酶切重组质粒及电泳分离所插入的DNA、从凝胶中回收DNA的方法与原理酶切重组质粒及电泳分离所插入的DNA、从凝胶中回收DNA第四次7/5基因芯片、RNAi等分子生物学技术介绍Northernblot录像上课时间：第3、4、5、6、7、8、9节课理论课教室：七号楼207室（7207）实验课教室：四号楼111室（4111）******************分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论分子生物学技术在中医药研究中的应用分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论1.临床研究中国中医科学院广安门医院吴志奎教授通过大量的临床研究发现，中医补肾生血方药对部分地中海贫血（一种先天遗传性疾病）患者很有效。问题：哪些患者有效？怎么起效的？从分子遗传的角度研究发现，α-地中海贫血是由于基因缺失所致，因此，患者病情重，中医药疗效差；而β-地中海贫血是由于基因突变所致，其中中医药对杂合子基因突变型患者效果明显，对纯合子型或异源双重杂合子基因突变型患者疗效不佳。进一步研究发现，中医药治疗机制并非改变基因突变型，而是促进珠蛋白mRNA的表达。这从基因调控水平上为中医药分型治疗提供了依据。分子生物学技术在中医药研究中的应用绪论2.基础研究复旦大学华山医院中西医结合研究所沈自尹院士开展的系列“肾本质”研究，发现“肾阳虚证”与人体的几大内分泌轴“下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴（甲状腺轴、性腺轴）”密切相关，于是将肾阳虚证定位到下丘脑。问题：下丘脑是如何调控这些内分泌腺的？肾阳虚证有何特点？在对下丘脑的基因表达调控研究方面，主要是应用分子生物学技术来加以检测。例如，应用RT-PCR技术发现肾阳虚证与下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素（CRF）的mRNA转录受抑有关。另外，