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新型冠状病毒检测技术规范N亚基因组荧光PCR检测程序

样本采集与处理

样本类型及采集方法

常见的适合进行N亚基因组荧光PCR检测的样本包括鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液等。鼻咽拭子采集时，需将拭子深入鼻腔，旋转贴壁至少3圈后取出；口咽拭子则在双侧扁桃体及咽后壁反复擦拭。痰液样本要求患者深咳后留取深部痰液。支气管肺泡灌洗液通过支气管镜采集获得。

样本保存与运输

采集后的样本应立即放入含有病毒保存液的采样管中，在2-8℃条件下可短时间保存，若需长时间保存则应放在-70℃以下的低温环境。运输过程中要确保样本始终处于合适的温度条件，避免反复冻融，应使用专门的生物样本运输箱，并做好标记和防护，防止样本泄漏和交叉污染。

样本处理

将采集好的样本进行涡旋振荡，使样本充分混匀。然后取一定量的样本进行核酸提取，常见的核酸提取方法有磁珠法和柱式提取法。磁珠法利用磁珠对核酸的特异性吸附，在不同溶液中实现核酸的分离和纯化；柱式提取法则是通过离心使核酸结合在柱子上，再经过一系列洗涤和洗脱步骤获得纯净的核酸。提取的核酸应保存在-20℃备用，且要避免多次冻融。

试剂与耗材准备

试剂选择

选择经过国家药品监督管理局（NMPA）批准的检测试剂，试剂应包含引物、探针、反应缓冲液、酶等成分。引物和探针需要针对新冠病毒N亚基因组的特定区域进行设计，具有高度的特异性和灵敏度