向日葵MAPK级联途径基因的克隆及抗逆性初步分析.pdf

目录

第1章绪论1

1.1植物MAPK级联途径的组成1

1.2植物MAPK级联途径参与调控逆境胁迫应答反应2

1.3MAPK级联途径调控的转录因子家族3

1.3.1bHLH转录因子家族3

1.3.2WRKY转录因子家族3

1.3.3NAC转录因子家族4

1.4向日葵MAPK级联途径的研究现状5

1.5研究的目的及意义5

1.6技术路线6

第2章向日葵MAPK级联途径基因的克隆及表达模式分析7

2.1试验材料7

2.1.1向日葵的培养7

2.1.2菌种与载体8

2.1.3培养基与试剂8

2.1.4酶及试剂盒8

2.1.5引物序列8

2.1.6主要仪器设备9

2.2试验方法10

2.2.1向日葵RNA的提取10

2.2.2反转录PCR扩增HaMAPK11-1/HaMAPK11-2/HaMAPK3-

1/HaMAPK13-2/HaMAPK6-2/HaMAPK710

2.2.3HaMAPK3-1/HaMAPK6-2/HaMAPK7/HaMAPK11-

1/HaMAPK11-2/HaMAPK13-2片段的胶回收11

2.2.4pMD19-T(simple)Vector与HaMAPK3-1/HaMAPK6-

2/HaMAPK11-1/HaMAPK11-2/HaMAPK13-2连接12

2.2.5pBI121载体的双酶切及回收12

2.2.6HaMAPK7基因片段与pBI121载体的连接13

2.2.7大肠杆菌感受态的制备13

2.2.8连接产物转化大肠杆菌感受态13

2.2.9大肠杆菌阳性转化子的PCR验证13

2.2.10向日葵中基因HaMAPK3-1/HaMAPK6-

2/HaMAPK7/HaMAPK11-1/HaMAPK11-2/HaMAPK13-2组织器

官表达量检测13

2.3结果与分析14

2.3.1HaMAPK3-1/HaMAPK6-2/HaMAPK7/HaMAPK11-

1/HaMAPK11-2/HaMAPK13-2基因的克隆14

2.3.2向日葵HaMAPK11-1/HaMAPK11-2/HaMAPK3-

1/HaMAPK13-2/HaMAPK6-2/HaMAPK7基因的组织器官表达分

析19

2.4讨论20

2.5本章小结21

第3章向日葵MAPK级联途径成员的亚细胞定位分析22

3.1试验材料22

3.1.1烟草的培养22

3.1.2菌种与载体22

3.1.3培养基与试剂22

3.1.4酶及试剂盒22

3.1.5引物序列22

3.1.6主要仪器设备23

3.2试验方法23

3.3结果与分析25

3.3.1HaMAPK6-1/HaMAPK6-2/HaMAPK7/HaMAPK13-2基因亚

细胞定位载体的构建25

3.3.2亚细胞定位载体转化农杆菌感受态27

3.3.3HaMAPK13-2/HaMAPK6-2/HaMAPK6-1/HaMAPK7的亚细

胞定位分析28

3.4讨论29

3.5本章小结30

第4章向日葵MAPK级联途径基因的功能分析31

4.1试验材料31

4.1.1植物材料31

4.1.2菌种与载体31

4.1.3培养基与试剂31

4.1.4酶及试剂盒32

4.1.5引物序列32