第三部分细胞培养与细胞融合.ppt

2）、合成培养基：根据动物的体液成份和细胞生长的需要，由各种营养物质组合而成，如MEM、DMEM、RPMI1640等。优点：能够标准化生产，组分和含量相对固定，成本低；缺点：不能完全满足细胞生长与增殖的需要。因此，在培养时，一般在培养液中加入一定量（10-15%）的血清，为细胞提供促贴壁因子或促生长因子。3）、无血清培养基第51页，共73页，星期日，2025年，2月5日第三部分细胞融合细胞融合（cellfusion）是20世纪60年代创立的，是指在一定条件下，将两个或多个细胞融合在一个细胞的过程，又称细胞杂交。第52页，共73页，星期日，2025年，2月5日1、两步培养技术（使用两个反应器）四、细胞培养中提高代谢产物的技术(1)第一个用于细胞生物量的累积，即尽可能快的使细胞量增长，用维持培养基；(2)第二个用于次级代谢产物的生产，即诱发和保持次生代谢旺盛并积累相应代谢产物，一般用生产培养基。第19页，共73页，星期日，2025年，2月5日2、固定化培养技术应用淀粉、琼脂、琼脂糖、藻酸钠、聚丙烯酰胺等作载体，将细胞固定在珠状胶囊或各种形状的支持物上。含CaCl2的培养基盖子空气出口海藻酸钠+细胞悬浮液喷嘴无菌空气入口第20页，共73页，星期日，2025年，2月5日在培养体系中加入水溶性和脂溶性有机物，或是具有吸附作用的多聚化合物（如大孔树脂等），使培养体系形成上、下两相，细胞在水相中生长和合成次生物质，次生物质分泌出来转到有机相中。3两相培养技术(2)前提条件：a添加的有机物无毒害作用b产物溶于有机物或被其吸收c两相易分离，有利于产物回收d有机物等不吸收培养基中的有效成分第21页，共73页，星期日，2025年，2月5日(1)诱导剂：?可引起代谢途径改变或代谢强度改变的物质,如无机离子、真菌提取液、葡聚糖等。?作用机理:可以调节代谢进程某些酶的活性,并对某些关键酶在转录水平上进行调节。4加入诱导剂及前体物第22页，共73页，星期日，2025年，2月5日作用：消除关键酶的阻碍、阻断内源性中间体的分隔和有效贮存，大大提高次生代谢物的产量。(2)前体物烟草：加入天仙子胺，则尼古丁产量降低而新烟碱含量大大提高第23页，共73页，星期日，2025年，2月5日第二部分

动物细胞分离与培养在活体内，动物细胞的形态与其功能密切相关。如肌细胞呈纤维状，便于收缩；神经细胞发出许多分支，便于形成网络；红细胞呈圆盘状，便于气体交换；上皮细胞呈不规则状，便于覆盖在器官表面相互挤压。第24页，共73页，星期日，2025年，2月5日原代培养（primaryculture):将组织取出来后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中，在培养箱中培养，这个过程称为原代培养。第25页，共73页，星期日，2025年，2月5日鸡胚原代细胞：在无菌条件下采取9－10日龄鸡胚↓除去头(或仅除去喙和眼)、爪和内脏，并剪成块↓用Hanks液等充分冲洗↓剪将其剪成lmm大小的碎块↓加入Hanks液或其他洗液，充分冲洗↓约4倍量的0.25％胰酶，并调整pH至7.6－7.8↓37℃水浴中感作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次↓吸弃上层胰酶溶液↓用洗液轻洗2次后↓吸管充分吹打，直至形成均匀的细胞悬液↓准备细胞计数↓单层细胞培养第26页，共73页，星期日，2025年，2月5日传（继）代培养（secondaryculture,passage,split):细胞在培养瓶中贴壁生长。随着细胞的生长和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为传代培养。第27页，共73页，星期日，2025年，2月5日在离体条件下，细胞一般表现为三种形态：（1）贴壁依赖型（anchorage-dependent)细胞；（2）非贴壁依赖型（anchorage-independent)细胞：也称为悬浮型细胞，包括来源于血液的细胞和许多肿瘤细胞。（3）兼性贴壁细胞：主要是一些细胞系，如CHO细胞。第28页，共73页，星期日，2025年，2月5日一、动物细胞体外培养的方法悬浮培养贴壁培养固定化培养大规模培养法第29页，共73页，星期日，2025年，2月5日类似于微生物发酵培养，但对机械剪切力敏