核酸的结构和功能与核苷酸代谢 (2).pptVIP

snRNA的种类核内小RNA核仁小RNA胞质小RNA，等等snRNA的功能参与hnRNA和rRNA的加工和转运。第55页，共113页，星期日，2025年，2月5日五、核酶某些RNA分子本身具有自我催化能力，可以完成rRNA的剪接。这种有催化作用的RNA被称为核酶(Ribozyme)1989年，美国科学家Altman和Cech由于发现核酶而获Nobel化学奖。是对传统观念的一种挑战。在医学上有特殊的用途。催化性DNA(deoxyribozyme)人工合成的寡聚脱氧核苷酸片段，也能序列特异性降解RNA。第56页，共113页，星期日，2025年，2月5日TheNobelPrizeinChemistry1989fortheirdiscoveryofcatalyticpropertiesofRNA????????????????????????????????????????????????SidneyAltmanThomasR.Cech?1/2oftheprize?1/2oftheprizeCanadaandUSAUSAYaleUniversity

NewHaven,CT,USAUniversityofColorado

Boulder,CO,USAb.1939b.1947核酶的发现第57页，共113页，星期日，2025年，2月5日第四节核酸的理化性质ThePhysicalandChemicalCharactersofNucleicAcid第58页，共113页，星期日，2025年，2月5日一、核酸一般的理化性质多元酸，较强的酸性。260nm特征性吸收峰核酸的高分子特性DNA为线性高分子，粘度极大，而RNA分子远小于DNA，粘度也小得多第59页，共113页，星期日，2025年，2月5日第60页，共113页，星期日，2025年，2月5日1.DNA或RNA的定量OD260=1.0相当于50μg/ml双链DNA40μg/ml单链DNA（或RNA）20μg/ml寡核苷酸2.判断核酸样品的纯度DNA纯品:OD260/OD280=1.8RNA纯品:OD260/OD280=2.0OD260的应用第61页，共113页，星期日，2025年，2月5日二、DNA的变性(denaturation)定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。变性后其它理化性质变化：OD260增高 粘度下降比旋度下降 浮力密度升高酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失第62页，共113页，星期日，2025年，2月5日DNA变性的本质是双链间氢键的断裂第63页，共113页，星期日，2025年，2月5日例：变性引起紫外吸收值的改变DNA的紫外吸收光谱增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。第64页，共113页，星期日，2025年，2月5日热变性解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。第65页，共113页，星期日，2025年，2月5日Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(meltingtemperature,Tm)。其大小与G+C含量成正比。第66页，共113页，星期日，2025年，2月5日三、DNA的复性与分子杂交DNA复性(renaturation)的定义在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。减色效应DNA复性时，其溶液OD260降低。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing)。第67页，共113页，星期日，2025年，2月5日在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件（温度及离子强度）下，就可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。核酸分子杂交(hybridization)第68页，共11