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（规范性）

葡萄糖氧化酶活力测定邻联茴香胺法

警示——本文件所用过氧化氢具有腐蚀性和氧化性，使用者应小心操作，避免溅到皮肤上或眼睛中。

一旦溅在皮肤上或眼睛中立即用大量水冲洗，严重者须治疗。本文件所用邻联茴香胺被国际癌症研究中

心（IARC）认定为可疑致癌物，使用时应做好防护。

A.1原理

在葡萄糖氧化酶的作用下，葡萄糖和氧反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型

邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。在540nm下测定吸光度值，

吸光度值与过氧化氢生成量成线性，由此计算葡萄糖氧化酶活力。

A.2试剂与溶液

除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的二级水。

A.2.1葡萄糖底物溶液（1.0mol/L）

称取经103℃±2℃干燥至恒重的无水葡萄糖18g于100mL烧杯中，用水溶解并定容至100mL。

4℃保存，有效期3天。

A.2.2过氧化物酶溶液（100IU/mL）

称取适量辣根过氧化物酶，用水溶解并定容至10mL，使得最终溶液中酶浓度为100IU/mL。4℃保

存，有效期为7天。冷冻保存，有效期2个月，使用前4℃条件下解冻，不可反复冻融。

A.2.3过氧化氢标准溶液（2mg/mL）

取30%过氧化氢，依据GB/T6684-2002中5.1所述方法测定过氧化氢含量。

称取0.2g过氧化氢（以纯过氧化氢计），精确至0.0001g，置于100mL烧杯中，用水溶解并定容

至100mL，临用现配。

A.2.4缓冲液（0.1mol/L，pH=6.0）

分别称取一水磷酸二氢钠12.10g和二水磷酸氢二钠2.189g于1000mL烧杯中，加入900mL水溶

解，调节pH至6.00±0.01，用水定容至1000mL。

生产者和使用者还可以探讨使用其他适用的缓冲体系。

A.2.5邻联茴香胺甲醇溶液（10mg/mL）

称取100mg邻联茴香胺至10mL棕色容量瓶中，用甲醇避光溶解并定容。4℃避光密封保存，有效

期1个月。

A.2.6邻联茴香胺使用液

移取0.1mL邻联茴香胺甲醇溶液，加入12mL缓冲液（A.2.4），临用现配。

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A.2.7硫酸溶液（10%，v/v）

移取10mL浓硫酸（纯度≥98%），缓慢加入装有80mL水的烧杯中，充分搅拌，冷却，定容至100

mL，转移至试剂瓶中保存。

A.3仪器与设备

A.3.1电子天平：感量0.1mg。

A.3.2可见光分光光度计。

A.3.3pH计：精确至0.01。

A.3.4漩涡混合仪。

A.3.5恒温水浴锅，50℃±0.2℃。

A.3.6移液器：5000μL、1000μL和100μL。

A.3.7计时器：每小时误差不超过5s。

A.3.8离心机：转速为4000r/min以上。

A.3.9磁力搅拌器。

A.4分析步骤

A.4.1标准曲线的绘制

分别移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL和8.00mL过氧化氢标准溶液（A.2.3）

于100mL容量瓶中，用水定容并混匀，获得过氧化氢系列标准工作溶液，其浓度分别为0.02mg/mL、

0.04mg/mL、0.06mg/mL、0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.