核酸类药物课件.pptVIP

（二）生產工藝酶合成法使用產氣腸桿菌，以（尿苷）肌苷和TCA為底物可以用酶法簡易地合成三氮唑核苷採用前段與後段由兩個不同的酶催化，即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶，後段使用嘌呤核苷磷酸化酶。四、阿糖胞苷（Cytarabine，Cytosinearabinoside，ArabinosylCytosine，Aracytidine）?（一）結構與性質阿糖胞苷又稱胞嘧啶阿拉伯糖苷，糖的組成部分是阿拉伯糖。白色或類自色結晶性粉末，無臭，易溶於水，略溶於甲醇、乙醇中，乙醚中極微溶。阿糖胞苷進入體內轉變為阿糖胞苷酸，抑制DNA聚合酶，阻止胞二磷轉變為去氧胞二磷從而抑制DNA的合成，干擾DNA病毒繁殖和腫瘤細胞增殖。只能注射。核酸類藥物?第一節核酸類物質的分離提取及其發酵生產?一、RNA與DNA的提取與製備（一）RNA的提取與製備1、工業用RNA的提取（1）RNA及其工業來源從微生物中提取RNA是工業上最實際和有效的方法。一些最常見的菌體含有豐富的核酸資源，如酵母、白地黴、多種抗菌素的菌絲體——青黴素，制黴菌素等菌體。通常在細菌中RNA占5％～25％，在酵母中占2.7％～15％，在黴菌中占0.7%～28％。在菌體內RNA含量的變化受培養基組成影響，其中關鍵是銨離子濃度和磷酸鹽濃度。培養酵母菌體收率高，易於提取RNA。很顯然在許多酵母中，早期細胞中的RNA含量高，其確切數值取決於碳、氮比例和培養基組成等。（2）高RNA含量酵母菌株的篩選可以從自然界篩選到RNA含量高的酵母菌株，也可用誘變育種的方法提高酵母菌的RNA含量。稀堿法：是用氫氧化鈉溶液（1%），使細胞壁變性，使核酸從細胞內釋放出來。需用酸中和PH7。然後除去菌體，將pH調至RNA的等電點（pH2.5），使RNA沉澱出來。上法的缺點是制得的RNAMr較低,(磷酸單脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90℃保持3~4h破壞酶)。濃鹽法：是用高濃度鹽溶液（6%~8%）處理，同時加熱，以改變細胞壁的通透性，使核酸從細胞內釋放出來。要避免分子降解，可採用苯酚法製備RNA。用苯酚處理生物材料，使蛋白質變性，然後離心，上層水溶液內含有全部RNA，可用乙醇沉澱出來。去氧核糖核蛋白溶於濃鹽溶液1mol/L,不溶於0.14mol/L,而核糖核蛋白溶於0.14mol/L鹽溶液。（4）RNA的提取實例：啤酒酵母是提取RNA的很好的資源。取100g壓榨啤酒酵母（含水份70%），加入230ml含NaOH3g的水，20℃以下緩慢攪拌30分鐘。用6mol／LHCl調至pH7，攪拌15分鐘，離心得清液255m1。冷至10℃以下，6mol／LHCl調pH2.5，置冷過夜，離心得RNAl.8g（純度80％）。（二）DNA的提取與製備1．工業用DNA的提取取新鮮冷凍魚精20kg，用絞肉機粉碎2次成漿狀，加入等體積水，攪拌均勻，傾入反應鍋內，緩慢攪拌，升溫至100℃，保溫15分鐘，迅速冷卻至20～25℃，離心除去魚精蛋白等沉澱物，獲得35L含熱變性DNA的溶液，經精確測定DNA含量後直接可用於酶法降解生產去氧核苷酸。如要製成固體狀DNA，在熱變性DNA溶液中逐漸加入等體積95％乙醇，離心可獲得纖維狀DNA，沉澱用乙醇、丙酮洗滌，減壓低溫乾燥得DNA粗品，產品含熱變性DNA50％～60％。2、具有生物活性DNA的製備動物內臟（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理鹽水經組織搗碎機搗碎1分鐘，勻漿於2500r／pm離心30分鐘，沉澱用同樣體積的生理鹽水洗滌3次，每次洗後離心，將沉澱懸浮於20倍重量的冷生理鹽水中，再搗碎3分鐘，加入2倍量5％的（用45%乙醇作溶劑）十二烷基磺酸鈉，並攪拌2～3小時，在0℃2500r／pm離心，在上層液中加入等體積的冷95％乙醇，離心即可得到纖維狀DNA，再用冷乙醇和丙酮洗滌，減壓低溫乾燥得粗品DNA。粗品DNA溶於適量蒸餾水，加入5％十二烷基磺酸鈉達1／10體積，攪拌1小時，經5000r／pm離心1小時，清液中加入NaCl達1mol／L，再緩慢加入冷95%乙醇，DNA析出，經乙醇、丙酮洗滌，真空乾燥得具有生物活性的DNA（活性DNA製備需在0～3℃操作）。二、用酶解法、發酵法和半合成法制備核苷酸（一）酶解法及堿水解法制備核苷酸1、酶解法製備去氧核苷酸桔青黴產生5`-磷酸二脂酶紅酵母產生3`-磷酸二脂酶2、酶解法製備戊糖核苷酸我國從