《靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025》解读.docxVIP

《靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025》解读

一、引言

感染性疾病始终是全球公共卫生领域的核心挑战，严重威胁人类健康。世界卫生组织（WHO）的统计数据显示，每年因感染性疾病丧生的人数多达数百万。从常见的流感、肺炎，到凶险的败血症、脑膜炎，感染性疾病的种类繁多，致病机制复杂。快速且精准地明确感染病原体，是临床治疗决策的基石，直接关系到患者的预后。若能在感染初期就准确判断病原体，医生便能及时制定针对性的治疗方案，有效缩短病程，降低死亡率。

传统的病原学检测方法，在感染性疾病的诊断历程中发挥了重要作用，但也逐渐暴露出诸多局限性。涂片检测依赖于病原体在显微镜下的形态特征，对于一些形态相似的病原体容易误诊，而且灵敏度较低，难以检测到低浓度的病原体。培养方法虽被视为病原体检测的“金标准”之一，但耗时漫长，对于生长缓慢的病原体，如结核分枝杆菌，培养时间可能长达数周；对于苛养菌、厌氧菌等特殊病原体，培养条件苛刻，阳性率往往不尽人意。免疫学检测依靠病原体特异性抗体与抗原的结合来检测病原体，然而抗体产生存在窗口期，在感染早期可能出现假阴性结果；同时，由于抗原抗体反应的交叉性，也容易导致假阳性。普通聚合酶链反应（PCR）一次只能针对有限的几种病原体进行检测，面对病原体种类繁多的感染性疾病，需要多次检测不同的病原体，效率较低。

随着分子生物学技术的迅猛发展，二代测序技术的出现为感染性疾病的诊断带来了新的曙光。其中，靶向二代测序（tNGS）技术脱颖而出，成为临床关注的焦点。tNGS技术通过精心设计特异性引物或探针，能够精准地富集样本中的目标病原体核酸。以多重PCR扩增法为例，它利用超多重PCR技术，针对多种病原体设计大量特异性引物，在PCR反应中对目标病原体的靶核酸序列进行高效扩增富集。探针捕获法则是通过合成与目标病原体核酸互补的探针，基于核酸杂交原理，将目标病原体核酸从样本中精准捕获出来。富集后的核酸经过高通量测序平台，能够快速、高效地测定其碱基序列，获得海量的测序数据。随后，借助先进的生物信息学分析方法，将测序结果与庞大的病原体数据库进行细致比对，不仅可以准确识别样本中存在的病原体种类，还能深入检测病原体的耐药基因、毒力基因等关键信息。

tNGS技术的优势显著。它的检测范围极为广泛，可同时检测细菌、真菌、病毒、寄生虫等多种病原体，这是传统检测方法难以企及的。在呼吸系统感染中，tNGS能够一次性检测出常见的流感病毒、肺炎链球菌、支原体、衣原体等多种病原体，为临床医生快速明确病因提供了有力支持。灵敏度高是tNGS的又一突出优势，它能够检测到样本中微量的病原体核酸，对于早期感染或病原体载量较低的情况，tNGS能够及时发现潜在的病原体，为早期诊断和治疗赢得宝贵时间。检测周期短也是tNGS的一大亮点，一般在24-48小时内即可获得检测结果，与传统培养方法数天甚至数周的时间相比，大大缩短了诊断时间，使患者能够及时得到有效的治疗。此外，tNGS还能够检测病原体的耐药基因，为临床合理选用抗菌药物提供重要参考，有助于减少抗菌药物的滥用，降低耐药菌的产生。

然而，tNGS在临床应用中也面临着一系列问题。应用场景不够明确，导致许多临床医生在面对感染性疾病患者时，难以准确判断何时适合进行tNGS检测。样本采集和处理环节缺乏规范，样本采集部位不准确、采集量不足、采集过程中发生污染等情况时有发生，严重影响检测结果的准确性。不同厂家的tNGS技术体系差异较大，从引物和探针设计、文库构建方法到测序平台和生物信息学分析软件，都缺乏统一标准，这使得检测结果的可比性差，给临床诊断带来了困难。在结果解读方面，由于缺乏标准化的解读流程和专业的解读人员，临床医生对tNGS检测报告的理解和应用存在困难，容易出现误诊和漏诊。

为了解决这些问题，中国医学装备协会检验医学分会组织专家制定了《靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025》。该共识的制定，旨在为tNGS的临床应用提供明确的规范和标准，统一检测流程、质量控制和结果解读等关键环节，充分发挥tNGS技术的优势，提高感染性疾病的诊疗水平，为患者带来更好的治疗效果。

二、靶向二代测序技术概述

2.1技术原理

tNGS技术的核心在于基于多重PCR或探针捕获的靶向富集原理。多重PCR扩增法是利用超多重PCR技术的强大能力，针对众多病原体精心设计大量特异性引物。这些引物如同精准的“导航仪”，在PCR反应中能够准确识别并结合目标病原体的靶核酸序列，进而对其进行扩增富集。例如，在检测呼吸道感染病原体时，可设计针对流感病毒、腺病毒、肺炎支原体等多种病原体的引物，通过一次PCR反应，同时扩增这些病原体的特定核酸片段，实现对多种病原体的富集。

探针捕获法则是另一种巧妙的富集方