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2025年pcr检测上岗证考试题及答案

一、单项选择题（共20题，每题2分，共40分）

1.以下哪项是PCR反应中TaqDNA聚合酶的最适反应温度？

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.60℃

答案：B

2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物浓度达到平台期的循环数

C.引物与模板结合的最佳温度点

D.荧光信号首次检测到的循环数

答案：A

3.实验室进行PCR检测时，样本处理区（第二区）的主要功能是：

A.配制PCR反应体系

B.核酸提取与纯化

C.PCR扩增反应

D.扩增产物分析

答案：B

4.用于检测RNA病毒的PCR方法需首先进行：

A.逆转录反应（RT）

B.热启动反应

C.巢式PCR

D.多重PCR

答案：A

5.以下哪种物质会抑制TaqDNA聚合酶活性？

A.EDTA（乙二胺四乙酸）

B.dNTP（脱氧核苷酸三磷酸）

C.Mg2+（镁离子）

D.BSA（牛血清白蛋白）

答案：A

6.引物设计时，避免3’端互补的主要目的是：

A.减少引物二聚体形成

B.提高退火温度

C.增加扩增产物长度

D.降低非特异性扩增

答案：A

7.实验室使用UNG酶（尿嘧啶-N-糖基化酶）的主要作用是：

A.降解扩增产物中的dUTP标记DNA，防止污染

B.提高Taq酶的热稳定性

C.增强引物与模板的结合效率

D.促进逆转录反应的完成

答案：A

8.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的检测原理是：

A.与双链DNA小沟结合后发出荧光

B.与特异性探针杂交后发出荧光

C.与引物结合后激发荧光

D.与单链DNA结合后淬灭荧光

答案：A

9.PCR扩增仪的温度准确性校准应至少每多久进行一次？

A.1个月

B.3个月

C.6个月

D.12个月

答案：C

10.进行核酸提取时，若样本为全血，常用的抗凝剂是：

A.肝素

B.EDTA-K2

C.枸橼酸钠

D.草酸钾

答案：B（注：肝素会抑制PCR反应，故不选）

11.以下哪项是实验室生物安全二级（BSL-2）的基本要求？

A.必须设置独立的空气净化系统

B.操作时需佩戴N95口罩

C.实验室内应配备生物安全柜

D.废弃物需经121℃高压蒸汽灭菌30分钟

答案：C

12.检测结果出现“假阴性”的可能原因不包括：

A.样本采集量不足

B.扩增仪温度失控（退火温度过高）

C.引物与模板发生错配

D.样本中存在大量PCR抑制物

答案：C（错配可能导致假阳性或无扩增，而非假阴性）

13.多重PCR与常规PCR的主要区别是：

A.使用更高浓度的Taq酶

B.在同一反应体系中加入多对引物

C.扩增产物长度更长

D.需进行两次PCR扩增

答案：B

14.核酸提取过程中，75%乙醇的主要作用是：

A.裂解细胞释放核酸

B.沉淀核酸

C.去除蛋白质等杂质

D.洗脱纯化的核酸

答案：C（注：乙醇用于洗涤核酸，去除盐离子和蛋白）

15.以下哪种方法可用于验证PCR引物的特异性？

A.琼脂糖凝胶电泳观察单一条带

B.测定引物的Tm值

C.计算引物的GC含量

D.检测引物的长度

答案：A

16.实验室质量控制中，“阴性质控品”应选择：

A.已知阳性的样本

B.不含目标核酸的空白样本

C.低浓度阳性样本

D.高浓度阳性样本

答案：B

17.PCR反应体系中，Mg2+浓度过高可能导致：

A.引物二聚体减少

B.非特异性扩增增加

C.扩增效率降低

D.产物量减少

答案：B

18.实时荧光定量PCR的标准曲线斜率反映的是：

A.扩增效率

B.检测灵敏度

C.线性范围

D.特异性

答案：A

19.进行核酸提取时，若使用磁珠法，磁珠的作用是：

A.裂解细胞

B.吸附核酸

C.去除蛋白质

D.洗脱核酸

答案：B

20.实验室发生扩增产物泄漏时，应立即采取的措施是：

A.用75%乙醇擦拭污染区域

B.用含1%次氯酸钠的溶液覆盖污染区域30分钟

C.开启紫外灯照射1小时

D.通风30分钟后继续实验