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2025年PCR培训理论练习题库(试题及答案)

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.PCR反应中，引物的作用是（）

A.提供DNA合成的3-OH末端

B.作为模板指导DNA合成

C.激活TaqDNA聚合酶活性

D.结合dNTP形成磷酸二酯键

答案：A

2.荧光定量PCR的“Ct值”指的是（）

A.扩增产物达到平台期的循环数

B.荧光信号达到设定阈值时的循环数

C.引物与模板完全结合的温度

D.反应体系中dNTP耗尽的时间点

答案：B

3.以下哪种物质可抑制TaqDNA聚合酶活性？（）

A.牛血清白蛋白（BSA）

B.乙二胺四乙酸（EDTA）

C.二甲基亚砜（DMSO）

D.甘油

答案：B

4.PCR扩增的延伸阶段，最适温度通常为（）

A.55-65℃

B.70-75℃

C.90-95℃

D.4℃

答案：B

5.用于检测RNA模板的PCR技术是（）

A.常规PCR

B.多重PCR

C.RT-PCR

D.巢式PCR

答案：C

6.引物设计时，避免3端互补的主要目的是（）

A.减少引物二聚体形成

B.提高扩增效率

C.降低退火温度

D.增加产物长度

答案：A

7.以下哪项不是PCR反应体系的基本成分？（）

A.模板DNA

B.限制性内切酶

C.dNTP

D.TaqDNA聚合酶

答案：B

8.荧光定量PCR中，SYBRGreenⅠ染料的作用是（）

A.特异性结合目标DNA序列

B.非特异性插入DNA双链发出荧光

C.标记引物用于信号检测

D.抑制非特异性扩增

答案：B

9.PCR实验室中，“污染控制”的核心措施是（）

A.增加反应体系体积

B.严格分区操作（试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区）

C.提高退火温度

D.延长延伸时间

答案：B

10.若PCR产物电泳结果出现“smearedband（拖尾条带）”，最可能的原因是（）

A.引物浓度过低

B.模板浓度过高

C.退火温度过高

D.Taq酶量不足

答案：B

11.内参基因（如GAPDH）在PCR中的主要作用是（）

A.作为阳性对照验证反应体系有效性

B.定量目标基因表达水平（校正模板量差异）

C.提高扩增特异性

D.降低非特异性产物

答案：B

12.以下哪种方法可用于PCR产物的定量分析？（）

A.琼脂糖凝胶电泳

B.紫外分光光度法

C.荧光定量PCR

D.聚丙烯酰胺凝胶电泳

答案：C

13.PCR反应中，dNTP的最佳浓度范围通常为（）

A.0.01-0.1mM

B.0.1-0.5mM

C.1-5mM

D.5-10mM

答案：B

14.模板DNA变性的温度一般为（）

A.55℃

B.72℃

C.94-98℃

D.4℃

答案：C

15.多重PCR的特点是（）

A.同时扩增多个目标片段

B.仅用于RNA模板检测

C.必须使用荧光探针

D.扩增效率高于常规PCR

答案：A

16.以下哪种物质可用于消除PCR反应中的交叉污染？（）

A.次氯酸钠（NaClO）

B.乙醇（75%）

C.去离子水

D.无水乙醇

答案：A

17.荧光探针法（如TaqMan）相比SYBRGreenⅠ法的优势是（）

A.成本更低

B.特异性更高（可区分同源序列）

C.操作更简单

D.无需设计引物

答案：B

18.PCR扩增效率（E）的理想范围是（）

A.80%-90%

B.90%-110%

C.110%-120%

D.70%-80%

答案：B

19.若PCR阴性对照出现扩增条带，最可能的原因是（）

A.模板浓度过高

B.引物设计错误

C.交叉污染（如气溶胶污染）

D.延伸时间不足

答案：C

20.实时荧光定量PCR的标准曲线用于（）

A.确定扩增产物的大小

B.计算目标基因的绝对或相对拷贝数

C.验证引物特异性

D.检测反应体系中的抑制剂

答案：B

二、多项选择题（每题3分，共30分，少选、错选均不得分）

1.引物设计的基本原则包括（）

A.长度18-