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2025年pcr证试题及答案

一、单项选择题（共15题，每题2分，共30分）

1.以下关于PCR反应体系组成的描述，错误的是（）

A.模板DNA需保证完整性和纯度

B.dNTP浓度过高可能导致非特异性扩增

C.TaqDNA聚合酶的最适反应温度为72℃

D.Mg2+浓度仅影响Taq酶活性，与引物退火无关

答案：D

2.引物设计时，若目的基因GC含量为60%，其退火温度（Tm）推荐范围为（）

A.45-55℃

B.55-65℃

C.65-75℃

D.75-85℃

答案：B

3.实时荧光定量PCR中，Ct值（循环阈值）的定义是（）

A.荧光信号达到仪器本底噪声时的循环数

B.荧光信号首次超过设定阈值时的循环数

C.荧光信号达到平台期时的循环数

D.荧光信号强度最高时的循环数

答案：B

4.以下哪种物质会抑制TaqDNA聚合酶活性？（）

A.EDTA

B.NaCl

C.Tris-HCl

D.MgCl?

答案：A

5.进行多重PCR时，关键技术要点不包括（）

A.优化引物浓度比例

B.确保各引物Tm值一致

C.增加dNTP浓度至常规2倍

D.调整Mg2+浓度

答案：C

6.逆转录PCR（RT-PCR）中，若使用Oligo(dT)引物合成cDNA，适用于（）

A.所有RNA模板

B.带poly(A)尾的mRNA

C.病毒单链RNA

D.核糖体RNA

答案：B

7.PCR扩增产物出现smeared（拖尾）条带，最可能的原因是（）

A.引物二聚体形成

B.模板浓度过低

C.退火温度过低

D.延伸时间过长

答案：C

8.数字PCR（dPCR）与实时荧光定量PCR的主要区别是（）

A.无需标准曲线即可绝对定量

B.检测灵敏度更高

C.反应体系更小

D.以上均是

答案：D

9.以下关于PCR实验室分区的描述，正确的是（）

A.试剂准备区可与扩增区共用

B.标本处理区需配备生物安全柜

C.产物分析区可使用普通离心机

D.各区空气流向应为扩增区→标本处理区

答案：B

10.进行qPCR时，若内参基因Ct值显著高于预期，可能的原因是（）

A.内参引物浓度过高

B.模板RNA降解

C.逆转录反应时间过短

D.B或C

答案：D

11.巢式PCR的主要优势是（）

A.提高扩增效率

B.增强产物特异性

C.缩短反应时间

D.降低成本

答案：B

12.PCR反应中，延伸阶段的主要作用是（）

A.双链DNA解旋为单链

B.引物与模板结合

C.Taq酶催化dNTP聚合

D.荧光信号收集

答案：C

13.以下哪种方法可用于检测PCR产物的特异性？（）

A.琼脂糖凝胶电泳

B.紫外分光光度法

C.酶联免疫吸附试验

D.流式细胞术

答案：A

14.若PCR反应无扩增产物，且阳性对照正常，最可能的原因是（）

A.热循环仪温度不准确

B.模板中含有抑制剂

C.Taq酶失效

D.引物设计错误

答案：B

15.荧光探针法qPCR中，TaqMan探针的作用机制是（）

A.与DNA双链结合发出荧光

B.被Taq酶5’→3’外切酶活性降解后释放荧光

C.与引物结合形成荧光复合物

D.在退火阶段发出稳定荧光

答案：B

二、多项选择题（共5题，每题3分，共15分。多选、少选、错选均不得分）

1.影响PCR扩增特异性的因素包括（）

A.引物设计

B.退火温度

C.Mg2+浓度

D.模板纯度

答案：ABCD

2.实时荧光定量PCR的定量方法包括（）

A.绝对定量

B.相对定量

C.终点定量

D.内参定量

答案：AB

3.PCR实验室质量控制应包括（）

A.环境清洁度监测

B.试剂有效期管理

C.仪器校准（如梯度PCR仪温度验证）

D.阳性/阴性对照设置

答案：ABCD

4.以下属于PCR抑制剂的物质有（）

A.血红蛋白

B.肝素

C.蛋白酶K

D.乙醇

答案：ABD

5.关于PCR产物纯化，正确的操作是（）

A.凝胶电泳后切取目的条带

B.使用硅胶柱吸附DNA时需调节pH至中性

C.洗脱时用预