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2025年pcr上岗证考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）

1.关于PCR引物设计的基本原则，以下错误的是？

A.引物长度通常为18-25个核苷酸

B.引物GC含量建议在40%-60%之间

C.引物3端避免连续3个G或C

D.引物5端需与模板严格互补

答案：D

解析：引物5端可添加酶切位点、标签等非互补序列，3端需与模板严格互补以保证延伸准确性。

2.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的作用机制是？

A.与双链DNA小沟结合发出荧光

B.与单链DNA磷酸骨架结合

C.特异性识别目标序列的探针

D.嵌入双链DNA碱基对之间发光

答案：D

解析：SYBRGreenI是非特异性荧光染料，通过嵌入双链DNA碱基对间发光，适用于扩增产物单一的情况。

3.PCR反应体系中，dNTP的最佳浓度范围是？

A.50-200μmol/L

B.200-500μmol/L

C.500-800μmol/L

D.800-1000μmol/L

答案：A

解析：过高浓度的dNTP会螯合Mg2+，抑制Taq酶活性；过低则影响扩增效率，推荐50-200μmol/L。

4.以下哪种情况会导致PCR产物出现非特异性扩增？

A.退火温度过高

B.引物浓度过低

C.模板量过少

D.Mg2+浓度过高

答案：D

解析：Mg2+浓度过高会增强Taq酶活性，导致引物与非靶序列错配，引发非特异性扩增。

5.实验室进行新冠病毒核酸检测时，阳性对照应选择？

A.待测样本的提取产物

B.已知浓度的病毒RNA标准品

C.灭活的细胞培养上清液

D.无菌生理盐水

答案：B

解析：阳性对照需使用已知浓度的靶标核酸标准品，用于验证扩增体系有效性。

6.实时荧光定量PCR中，Ct值的定义是？

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增曲线平台期的荧光强度值

C.基线期荧光信号的平均值

D.荧光信号首次超过背景值的时间点

答案：A

解析：Ct（CycleThreshold）值指荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数，与初始模板量成反比。

7.PCR实验室分区中，产物分析区（四区）的主要功能是？

A.样本接收与处理

B.核酸提取与纯化

C.扩增反应体系配制

D.扩增产物检测与分析

答案：D

解析：PCR实验室四区为产物分析区，用于扩增后的检测（如电泳、荧光读取等），需严格避免污染。

8.进行PCR实验时，防止气溶胶污染的关键措施是？

A.使用带滤芯的吸头

B.每日紫外线照射30分钟

C.实验人员佩戴双层手套

D.所有试剂4℃保存

答案：A

解析：带滤芯吸头可有效阻断移液器内部的气溶胶污染，是防控交叉污染的核心措施。

9.TaqMan探针的设计要求中，错误的是？

A.探针长度18-25bp

B.探针GC含量略高于引物

C.探针5端标记荧光报告基团（如FAM）

D.探针3端标记荧光淬灭基团（如TAMRA）

答案：B

解析：TaqMan探针GC含量应与引物相近，避免形成二级结构影响杂交效率。

10.以下哪种物质会抑制PCR反应？

A.血液中的血红蛋白

B.提取过程中的无水乙醇

C.扩增产物中的dNTP

D.样本保存液中的EDTA

答案：A

解析：血红蛋白含血红素，可螯合Mg2+并抑制Taq酶活性；无水乙醇经洗脱后残留量极低时不影响，EDTA在低浓度下可通过调整Mg2+浓度抵消抑制。

11.荧光定量PCR标准曲线的R2值应至少达到？

A.0.90

B.0.95

C.0.98

D.1.00

答案：C

解析：标准曲线R2≥0.98表明线性关系良好，可用于准确定量。

12.PCR扩增仪的温度准确性校准应使用？

A.水银温度计

B.专用温度校准模块

C.扩增阳性对照

D.实时荧光监测

答案：B

解析：需使用经计量认证的温度校准模块（如带多通道传感器的校准仪），确保各孔温度与设定值一致。

13.核酸提取过程中，加入RNase抑制剂的主要目的是？

A.防止DNA降解

B.抑制RNA酶活性

C.提高DNA纯度

D.促进蛋白质变性

答案：B

解析：RNase抑制剂通过与RNA酶结合，防止样本中RNA被降解，适用于RNA为模板的RT-PCR。

14.以下哪项是PCR实验室“单向工作流程”的正确顺序？

A.产物分析区→扩增区→提取区→准备区