合成生物学改造增强希瓦氏菌单糖利用.pdfVIP

摘要

产电微生物的底物利用能力和摄取范围是制约其胞外电子传递效率的瓶颈。

Shewanellaoneidensis

希瓦氏菌（）是一种典型的模式产电微生物，但因缺乏完整

的糖代谢途径和相关的底物转运蛋白，仅能利用乳酸、乙酸、丙酮酸等作为碳源

及能源，而不能利用木糖、葡萄糖等储量丰富、分布广泛的碳源物质。合成生物

学方法可以选择性地拓展产电微生物的底物谱，且能够调控其底物摄取速度，是

工程菌株改造的有效策略。

针对上述问题，本文在S.oneidensisMR-1基因组水平敲除转录抑制因子基

因Nagr，获得底盘菌S114，之后采用合成生物学策略构建了重组希瓦氏菌株

S135、S134、S163。将木糖转运蛋白基因gxf1及Weimberg途径基因XylB（编

D-XylCD--γ-XylDD-

码木糖脱氢酶）、（编码木糖内酯酶）、（编码木糖酸脱水

XylX2--3--D-XylAα-

酶）、（编码酮脱氧木糖酸脱水酶）及（编码酮戊二酸半醛

脱氢酶）在S114中异源表达，获得木糖利用菌株S135，木糖利用及比生长速率

0.233±0.004g/(L·h)0.034±0.002h-1glfED

分别为和。将葡萄糖转运蛋白基因及

glkeddS114

途径基因（编码葡萄糖激酶）、（编码磷酸葡萄糖酸脱水酶）引入，

获得葡萄利用菌株S134，葡萄糖利用和比生长速率分别达到0.242±0.006g/(L·h)

0.039±0.002h-1S135S134

和。优选后，将菌株与中异源木糖及葡萄糖转运和代

谢基因在S114中组合表达，最终获得木糖葡萄糖共利用菌株-S163，葡萄糖利

-1

用和比生长速率为0.187±0.007g/(L·h)和0.061±0.004h，木糖利用和比生长速率

0.125±0.008g/(L·h)0.051±0.003h-1/1:1

为和，木糖葡萄糖比例为时，混糖共利用

0.210±0.009g/(L·h)0.065±0.003h-1

和比生长速率为和。

探究了菌株S163以木糖及葡萄糖为碳源的生长水平、底物利用、产电性能

及产电机理。发现混糖中葡萄糖与单独利用速率相当，木糖利用速率0.023±0.006

g/(L·h)，明显受到葡萄糖抑制。混糖比例优化后，确定了菌株S163利用混糖碳

源生长和产电的较优木糖/葡萄糖比例为3:1和4:1，在4:1时菌株比生长速率高

0.068±0.002h-10.027±0.003g/(L·h)1:117.4%

达；木糖利用速率为，较时，提高了。

缓解了木糖葡萄糖共利用过程中葡萄糖对木糖利用的抑制问题。-

最后，发现微生物燃料电池（Microbialfuelcell,MFC）产电性能与菌株S