实验三血清醋酸纤维薄膜电泳.pptVIP

第1页，共32页，星期日，2025年，2月5日实验目的：掌握电泳的基本原理，加深对蛋白质两性解离性质的理解。掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的基本操作。第2页，共32页，星期日，2025年，2月5日实验原理

第3页，共32页，星期日，2025年，2月5日电泳技术（Electrophoresis）电泳的概念：带电物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳.正极负极带负电粒子带正电粒子第4页，共32页，星期日，2025年，2月5日背景：电泳现象早在十九世纪初就已发现（1808年俄国物理学家Re?ss进行了世界上第一次电泳实验）。但电泳技术的广泛应用，则是在1937年用滤纸作为支持介质成功地进行纸电泳以后，是近几十年以来，电泳技术发展很快，各种类型的电泳技术相继诞生，在生物化学、医学、免疫学等领域得到了广泛应用。第5页，共32页，星期日，2025年，2月5日为了克服溶液对电泳离子的影响，一般在电泳体系中加入不流动的固体支持物。（一）按支持物的物理性状不同，可分为：1．滤纸及其它纤维(如玻璃纤维、聚氯乙烯纤维薄膜、醋酸纤维)电泳2．粉末电泳：如纤维素粉、淀粉电泳；3．凝胶电泳：如琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳；4．丝线电泳：尼龙丝、人造丝电泳。电泳的分类第6页，共32页，星期日，2025年，2月5日（二）按支持物的装置形式不同，可分为：1．平板式电泳：支持物水平放置；2．垂直板式电泳：聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳；3．垂直柱式电泳：聚丙烯酰胺盘状电泳第7页，共32页，星期日，2025年，2月5日(三)按pH的连续性不同，区带电泳可分为：1．连续pH电泳：即整个电泳过程pH保持不变，如常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。2．非连续pH电泳：缓冲液和电泳支持物间有不同的pH的电泳，如聚丙烯酰胺凝胶盘状电脉，等电聚焦电泳等。第8页，共32页，星期日，2025年，2月5日电泳速度:带电粒子在电场中运动时，单位电场强度内粒子运动的速度，以u表示，即V—粒子运动的速度X—电场强度Q—粒子所带电荷r—粒子的半径η—介质的粘度影响电泳速度的主要因素

第9页，共32页，星期日，2025年，2月5日1.样品本身:分子带电量：Q越多，u越大；分子大小:分子小，r越小，u越大；分子形状：形状越小，与支持物介质摩擦 越小，u越大。形状越规则，u越大，反之则越小。球形分子纤维状分子第10页，共32页，星期日，2025年，2月5日2.缓冲溶液：A.pH值：(pH-pI)越大，Q越多，u越大B.离子强度(I)：离子强度代表所有类型的离子所产生的静电力，也就是全部的离子效应，它取决于离子电荷的总数，而与溶液中盐类的性质无关。溶液的离子强度越高，带电质点的泳动速度越慢；离子强度越低，质点泳动的速度越快。一般离子强度的选择范围在0.02～0.2之间。第11页，共32页，星期日，2025年，2月5日3.电场强度(X):

电场强度：电泳支持物上每厘米的电位降，也称电势梯度。X越大，u越快。支持物越短，X越大，u越快。注意：电场强度越大或支持物越短，电流将随之增加，产热也增加，影响分离效果。在进行高压电泳的时候必须用冷却装置，否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离。第12页，共32页，星期日，2025年，2月5日电泳缓冲液相对于固体支持物的移动称电渗。如纸电泳时，滤纸吸附OH-带负电荷，与纸接触的缓冲液带正电荷向负极移动，会对颗粒的移动造成不良影响，故电泳时，电渗小些为好。4．电渗现象第13页，共32页，星期日，2025年，2月5日醋酸纤维薄膜电泳第14页，共32页，星期日，2025年，2月5日醋酸纤维是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而成。涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120微米。醋酸纤维素薄膜电泳有以下优点：微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象第15页，共32页，星期日，2025年，2月5日实验原理以蛋白质为例：pHpIpH=pI