2025年pcr考试试题及答案.docxVIP

2025年pcr考试试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.关于聚合酶链式反应（PCR）的基本原理，以下描述错误的是：

A.通过变性-退火-延伸三步循环实现DNA扩增

B.引物与模板的结合依赖碱基互补配对

C.TaqDNA聚合酶具有3→5外切酶活性，可校正扩增错误

D.扩增产物的长度由引物在模板上的结合位置决定

2.某引物序列为5-AGCTGCGATCG-3，其GC含量为：

A.50%

B.60%

C.70%

D.80%

3.实时荧光定量PCR（qPCR）中，若某样本的Ct值为25，阴性对照的Ct值为38（仪器检测下限为40），则该样本的结果应判定为：

A.阳性

B.阴性

C.临界值，需重复检测

D.污染导致假阳性

4.逆转录PCR（RT-PCR）中，若使用随机六聚体作为反转录引物，其主要优势是：

A.特异性扩增mRNA的3端

B.适用于全长mRNA的反转录

C.仅扩增具有polyA尾的RNA

D.提高高GC含量RNA的反转录效率

5.以下哪种物质会显著抑制TaqDNA聚合酶活性？

A.0.5mmol/LMg2+

B.100ng/μL基因组DNA

C.0.1%TritonX-100

D.50mmol/LEDTA

6.设计多重PCR引物时，最关键的质量控制指标是：

A.引物长度均一（18-22bp）

B.各引物对的Tm值差异≤2℃

C.引物3端避免连续G/C

D.引物间无互补序列（尤其3端）

7.数字PCR（dPCR）与qPCR的核心区别在于：

A.dPCR无需标准曲线即可绝对定量

B.dPCR使用SYBRGreen染料，qPCR使用探针

C.dPCR扩增效率更高

D.dPCR可检测更低丰度的突变

8.PCR扩增产物出现非特异性条带时，优化策略不包括：

A.提高退火温度

B.减少引物浓度

C.增加Taq酶用量

D.缩短延伸时间

9.某实验室进行结核分枝杆菌PCR检测，阳性对照无扩增，阴性对照正常，可能的原因是：

A.样本核酸提取失败

B.阳性对照模板降解

C.扩增仪温度校准偏差

D.引物与结核分枝杆菌变异株不匹配

10.以下关于PCR污染防控的措施，错误的是：

A.试剂配制、模板处理、扩增产物分析分区操作

B.使用UNG酶（尿嘧啶糖基化酶）处理反应体系

C.每日实验后用75%乙醇擦拭工作台

D.移液器定期更换滤芯

11.计算引物5-GATCGATCGATCGATC-3（16bp）的Tm值（使用Wallace公式：Tm=2(A+T)+4(G+C)）：

A.40℃

B.44℃

C.48℃

D.52℃

12.若PCR反应体系总体积为25μL，其中模板DNA体积为2μL，引物终浓度为0.5μmol/L（引物储存液浓度为10μmol/L），则需要加入的引物体积为：

A.0.5μL

B.1.25μL

C.2μL

D.2.5μL

13.以下哪种PCR技术可用于检测基因拷贝数变异？

A.巢式PCR

B.touchdownPCR

C.实时荧光定量PCR（绝对定量）

D.反向PCR

14.某样本PCR扩增后电泳结果显示条带位置正确但亮度极低，可能的原因是：

A.模板浓度过高

B.延伸时间过长

C.循环数不足（如仅20个循环）

D.引物浓度过高

15.关于PCR反应中Mg2+浓度的作用，以下描述正确的是：

A.浓度过高会降低引物与模板的结合特异性

B.浓度过低会导致Taq酶失活

C.最佳浓度通常为5-10mmol/L

D.与dNTP浓度无关

二、多项选择题（每题3分，共15分，少选、错选均不得分）

16.影响PCR扩增效率的因素包括：

A.模板的纯度和浓度

B.引物的Tm值和特异性

C.dNTP的浓度（过高或过低）

D.扩增仪的温度准确性

17.实时荧光定量PCR中，常用的荧光检测方法有：

A.SYBRGreenI染料法

B.TaqMan探针法

C.分子信标（MolecularBeacon）

D.高分辨率熔解曲线（HRM）

18.以下属于PCR质量控制内容的有：

A.空白对照（无模板）无扩增

B.阳性对照Ct值在预期范围内

C.内参基因（如GAPDH）扩增效率≥90%

D.重复样