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2025年药物分析题（附答案）

一、药物分析试题（2025年）

题目：头孢克肟原料药质量分析

已知信息：头孢克肟（C??H??N?O?S?）为第三代头孢菌素类抗生素，分子结构中含β-内酰胺环（易水解开环）、氨基噻唑环（λmax约254nm）及羧基（pKa≈2.5）。其原料药需符合2025年版《中国药典》要求，主要检查项目包括有关物质、残留溶剂（甲醇、丙酮）、水分（不得过2.0%）、炽灼残渣（不得过0.2%）；含量测定采用高效液相色谱法（HPLC）。

实验条件：

-色谱柱：C??键合硅胶柱（250mm×4.6mm，5μm）；

-流动相A：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至3.0）；流动相B：乙腈；

-梯度洗脱程序：0-15min（95%→75%A），15-25min（75%→60%A），25-30min（60%→95%A），平衡5min；

-检测波长：254nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；

-系统适用性溶液：含头孢克肟对照品（1.0mg/mL）与杂质A（开环降解物，0.01mg/mL）、杂质B（脱乙酰基产物，0.01mg/mL）的混合溶液。

请根据以上信息完成以下问题：

1.鉴别试验（15分）：

药典规定头孢克肟需采用红外分光光度法与HPLC法进行鉴别。请分别说明两种方法的鉴别原理，并设计红外光谱与HPLC鉴别操作的关键步骤（需包含对照物质选择）。

2.有关物质检查（25分）：

（1）头孢克肟有关物质主要来源于合成工艺杂质与贮藏降解产物。请分析β-内酰胺环水解生成的杂质A（分子量比头孢克肟大18）的结构特征，并说明其在HPLC中的保留行为（与主峰比较）；

（2）采用自身对照法测定有关物质时，需配制“供试品溶液”（1.0mg/mL）与“对照溶液”（10μg/mL）。若供试品溶液色谱图中杂质A峰面积为500mAU·min，杂质B峰面积为350mAU·min，对照溶液主峰面积为4800mAU·min，计算杂质A与杂质B的含量（%）；

（3）系统适用性试验需验证哪些指标？请结合实验条件说明具体要求（至少列出3项）。

3.残留溶剂测定（20分）：

采用气相色谱法（GC）测定甲醇与丙酮残留，色谱条件为：DB-624毛细管柱（30m×0.32mm，1.8μm），检测器FID，进样口温度200℃，检测器温度250℃，柱温程序：40℃维持5min，以10℃/min升至120℃，维持2min；顶空进样（平衡温度80℃，平衡时间30min）。

（1）为何选择顶空进样而非直接进样？

（2）若甲醇（限度0.3%）与丙酮（限度0.5%）的校正因子分别为1.2与0.8，取供试品0.1g，精密加入内标溶液（正丙醇，0.2mg/mL）2mL，稀释至10mL，顶空进样测得甲醇峰面积1500，内标峰面积2000；丙酮峰面积2500，内标峰面积2000。计算甲醇与丙酮的残留量（%），并判断是否符合规定。

4.含量测定（20分）：

采用外标法测定头孢克肟含量，精密称取对照品25.0mg（纯度99.8%），置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度（溶液1）；精密量取溶液15mL，置25mL量瓶中，稀释至刻度（溶液2）；取供试品20.0mg，同法制备供试品溶液。测得溶液2峰面积为3200mAU·min，供试品溶液峰面积为3050mAU·min。计算供试品的含量（%）（保留3位有效数字）。

5.方法学验证（20分）：

需对HPLC含量测定方法进行验证。请说明专属性、线性、精密度（重复性）、准确度、耐用性的验证目的，并设计具体验证方案（每项至少2个关键操作步骤）。

二、答案

1.鉴别试验

（1）红外分光光度法原理：头孢克肟分子中含特征官能团（如β-内酰胺环的C=O伸缩振动1760cm?1、氨基噻唑环的C=N伸缩振动1620cm?1、羧基的O-H伸缩振动3400cm?1），其红外吸收光谱的特征峰位置与强度可反映分子结构，与对照品光谱比对可确认同一性。

操作步骤：取供试品与头孢克肟对照品各约1mg，分别与干燥溴化钾100mg研磨混匀，压片，记录红外吸收光谱，应与对照品光谱一致。

（2）HPLC法原理：在相同色谱条件下，头孢克肟与对照品的保留时间（tR）应一致，利用色谱保留行为的专属性进行鉴别。

操作步骤：分别配制供试品溶液（1.0mg/mL）与对照品溶液（1.0mg/mL），注入HPLC系统，记录色谱图。供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致（偏差≤±2.0%）。

2.有关物质检查

（1）杂质A结构特征与保留行为：