一种样品进-结果出的食源性致病菌快速检测方法研究.pdfVIP

摘要

民以食为天，食以安为先。当前食品行业发展空前繁荣，短期保质食品蓬勃

发展，食品安全问题越来越被大众关注，而食源性致病菌引起的食品安全事件频

繁发生，对人民身体健康及国家经济发展造成了严重威胁，因此对食源性致病菌

进行检测具有重要意义。国家标准主要基于培养法，耗时费力，对检测环境要求

十分严格。环介导等温扩增技术(LAMP)因检测速度快、灵敏度高、特异性强以

及反应条件温和等优点在食源性致病菌检测领域得到了广泛应用，然而核酸提取

往往需要依赖实验室设备且耗时长，无法满足现场检测需求。为克服上述不足，

本文将纸基材料与微流控技术相结合，建立了集DNA提取与LAMP扩增检测于

一体的检测方法，并成功用于牛奶等模拟真实样品的检测，该方法大大缩短了检

测时间，简化了操作步骤。

本文首先概述了常见的食源性致病菌及其危害，对食源性致病菌检测的国内

外研究现状进行了综述。综合分子生物学检测必经的核酸提取、核酸扩增及扩增

产物检测的不同方法，本文选用基于煮沸法细胞裂解及LAMP扩增，采用钙黄

绿素荧光检测扩增产物。基于上述理论搭建了食源性致病菌快速检测装置，以大

肠杆菌O157:H7为目标菌株，对设计的纸基微芯片进行了可行性测试及灵敏度

测试，实验结果表明纸基具备发生LAMP反应的能力，核酸浓度对数值与G通

道灰度值相关系数达0.9969，检测限为0.01535ng/μL，能够实现多个样品的同时

检测。使用壳聚糖对纸基材料进行修饰，实现了样品进-结果出的检测。实验测定

了人工污染的模拟牛奶样品，结果表明致病菌浓度对数值与G通道灰度值具有

良好的线性关系，线性度达0.9812，检测限为10.9CFU/mL，耗时仅需38min。

分别使用样品进-结果出的检测方法、PCR法、培养法完成了盲样实验，三种方

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法检出率均为100%，计算得盲样浓度值为5.2×10CFU/mL。

本文提出了一种将壳聚糖修饰纸基与微流控技术相结合的食源性致病菌样

品进-结果出的快速检测方法，基于该方法的检测具有成本低廉、操作简单、耗时

短、灵敏度高等优点，具有多通道、高通量检测能力，是一种新型食源性致病菌

现场检测技术。

关键词：食品安全，食源性致病菌，环介导等温扩增，样品进-结果出，纸基微

流控芯片，现场检测

ABSTRACT

Foodcountsmostforpeople,ofwhichsafetycomesfirst.Asthefoodindustryand

short-termqualityguaranteedfooddevelopingunprecedentedlyprosperous,foodsafety

problemsareincreasinglyconcernedbythepublic.Detectionoffoodbornepathogens

playsanimportantroleinmaintaininghumanhealth,becausefrequentlyfoodsafety

incidentscausedbyfoodbornepathogenshaveposedseriousthreattopeople’shealth

andeconomicdevelopment.Thenationalstandardmethodbasedoncultivationistime

consuming,laboriousandhasstrictrequirementsonthedetectionenvironment.Loop-

mediatedisothermalamplification(LAMP)iswidelyusedinfoodbornepathogens

detectionduetoitsadvantagesoffastdetection,highlysensitivity,strongspecificity

andmildreactionconditions.However,nuclei