巨噬细胞移动抑制因子拮抗剂ISO-1对脓毒症小鼠中性粒细胞外捕获网形成的影响.pdfVIP

巨噬细胞移动抑制因子拮抗剂ISO-1对脓毒症小鼠中性粒细胞外捕获

网形成的影响

摘要

背景：脓毒症是由于机体对感染反应失调引起的威胁人类生命安全，导致器官功

能障碍的综合征。目前，缺乏针对脓毒症治疗的有效方法，巨噬细胞迁移诱导因

子（MIF）和中性粒细胞外捕获网（NETs）在炎症反应中扮演重要角色。最近的

研究表明，MIF和NETs可能与脓毒症严重程度相关联。

目的：本研究旨在探讨脓毒症小鼠中，MIF抑制剂ISO-1对脓毒症小鼠的影响，

通过检测NETs的标志物（髄过氧化物酶（MPO）和瓜氨酸化组蛋白H3（Cit-H3））

在脓毒症中的表达，进一步阐述ISO-1与NETs在脓毒症小鼠中的相关性。

方法：根据完全随机的方法，将SPF级C57BL/6小鼠分为假手术组（Sham）、模

型组（CLP）和治疗组（CLP+ISO-1）。通过盲肠结扎穿刺的方式建立脓毒症小鼠

模型，并采集造模后6小时、12小时和24小时各组小鼠的肺部、肠道以及血液

样本。通过观察小鼠的一般状况进行临床评分，组织HE染色及血清中IL-6的表

达进一步确定造模成功。采用ELISA测定血清中MPO及MIF的表达，免疫组化

观察肠道中MIF的表达，明确肠道损伤。用不同浓度的全反式维A酸（ATRA）

刺激HL-60细胞5天，用台盼蓝染色、吉姆萨染色及流式细胞术分析选择最佳的

刺激浓度，用荧光探针的方法测定dHL-60细胞中活性氧（ROS）的产生，免疫荧

光分析细胞中Cit-H3的表达，明确NETs与ISO-1的相关性。

结果：与Sham组相比，盲肠结扎穿刺构建的脓毒症小鼠模型在造模后均出现明

显的活动减少、呼吸急促和眶周渗出物，且血清中IL-6、MPO及MIF表达明显

升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），肺脏及肠道组织HE染色见明显的炎症

渗出及组织损伤，这种损伤随时间增长而加重。与CLP组相比，CLP+ISO-1组小

鼠一般生理状态评分好转（P＜0.05），血清中IL-6、MPO及MIF也明显下降（P

＜0.05），HE染色见组织损伤减轻，肠道免疫组化进一步表明ISO-1能够抑制MIF

表达，减轻肠道损伤，且ISO-1治疗能够提高脓毒症小鼠生存率。在细胞实验中，

1μM的ATRA刺激的dHL-60细胞中，中性粒细胞活力和比重较高，LPS能够诱

导dHL-60细胞产生ROS及NETs，而LPS+ISO-1组ROS及Cit-H3表达较LPS

组及LPS+rMIF组减少。

结论：在脓毒症早期的小鼠模型中NETs形成增加，ISO-1能抑制MIF，减少NETs

生成，此外，ISO-1能够减少LPS诱导的dHL-60细胞产生ROS及NETs。

硕士研究生：郑志强（急诊医学）

指导教师：王培戈（教授）

关键词：脓毒症；中性粒细胞外捕获网；巨噬细胞移动抑制因子；肠损伤

EffectofMacrophageMigrationInhibitoryFactorAntagonistISO-1

ontheFormationofNeutrophilExtracellularTrapsinSepticMice

Abstract

Background:Sepsisisalife-threateningconditioncharacterizedbydysregulated

organfunctioninresponsetoinfection.Currently,theefficacyofsepsistreatment

remainssuboptimal.Macrophagemigration-inhibitoryfactor(MIF)andneutrophi