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瑞香素抗小鼠病毒性肺炎作用及机制研究

研究背景：

随着以新冠为代表的病毒性肺炎的全球肆虐，如何有效减轻病毒性肺炎产生

的过度炎症反应成为其治疗的难点。肺炎病毒感染情况下，可能会持续激活M1

表型巨噬细胞，以及促进炎症性Th17和Th1细胞的分化，引起“细胞因子风暴”

促进肺部炎症反应的进一步进展，从而导致肺纤维化等严重后果。巨噬细胞与炎

症性肺疾病的发病机制有关，其可通过释放趋化因子、炎性细胞因子以及活化转

录因子等方式参与肺组织炎性损伤的形成与发展，在驱动细胞因子风暴中起到关

键作用。在肺炎进展的过程中如何调控巨噬细胞，平衡其促炎及抗炎表型成为影

响病毒性肺炎预后的关键。

香豆素是以苯和α-吡喃酮为基本结构的芳香族化合物。研究发现，香豆素对

人体健康具有重要作用，且广泛存在于在自然界的各类植物、及少数的真菌、细

菌中，对人体健康具有重要作用。瑞香素（Daphnetin，Daph）作为香豆素的一种，

已知具有抗炎、抗氧化特性，广泛地被应用于各种炎症性疾病的治疗。目前研究

发现，瑞香素可以靶向NF-κB(nuclearfactorkappa-B,NF-κB)，进而有效下调小胶

质细胞中炎症介质的产生。此外在急性胰腺炎中，也发现瑞香素可以降低Toll

样受体-4（Toll-likereceptor4,TLR4）的表达，并抑制NF-κB信号通路的激活，

在胰腺炎的治疗中显示出巨大的潜力。以上研究发现均可以佐证瑞香素是免疫和

炎症反应的有效调节因子。因此我们研究设想瑞香素可能通过调控NF-κB信号

通路的激活，在治疗病毒性肺炎方面发挥作用。

NF-κB对促炎基因的产生至关重要。静息状态下，细胞内NF-κB与抑制因

子IκB(theNF-κB-IκBcomplex)结合。激活状态下，IκB的磷酸化被迅速诱导，导

致其泛素化和蛋白酶体降解。这种降解促进了NF-κB的RelA亚基从IκB中释放

出来，进而易位到细胞核，与目标基因的一致序列结合。IκB-NF-κB信号通路的

在很大程度上决定了细胞因子、趋化因子和其他炎症介质的表达。因此，减少巨

噬细胞中NF-κB信号通路的激活被认为对于预防炎症相关疾病的发生和发展至

关重要。

基于此，本研究以巨噬细胞介导的炎症信号通路为切入点，探索其对病毒性

肺炎的治疗机制。本研究通过构建甲型H1N1/FM1病毒诱导的小鼠病毒性肺炎

模型，通过探讨不同剂量瑞香素对病毒性肺炎小鼠的治疗效果，深入研究瑞香素

调控NF-κB信号通路，进而影响巨噬细胞极化表型的分子机制，为临床应用提

供理论依据。

实验方法：

1.通过气管滴注甲型H1N1病毒建立病毒性肺炎小鼠模型。

2.在病毒性肺炎小鼠模型中，将造模成功小鼠随机分为对照组小鼠、模型组

小鼠、低剂量实验组（瑞香素25mg/kg/d）小鼠、中剂量实验组（瑞香素50mg/kg/d）

小鼠、高剂量实验组（瑞香素100mg/kg/d）小鼠以及阳性对照组（地塞米松组）

小鼠。瑞香素以及地塞米松给药治疗3/8天后，测量各组小鼠体重变化情况。

3.在病毒性肺炎小鼠模型中，不同剂量瑞香素以及地塞米松给药治疗3/8天

后，HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化。

4.在病毒性肺炎小鼠模型中，不同剂量瑞香素以及地塞米松给药治疗3/8天

后，计算各组小鼠肺系数（肺系数肺湿重／体重×100％）变化。

5.在病毒性肺炎小鼠模型中，不同剂量瑞香素以及地塞米松给药治疗3/8天

后，qPCR检测各组小鼠肺组织IL-6、IL-1β、TNF-ɑmRNA表达水平变化。

6.在病毒性肺炎小鼠模型中，不同剂量瑞香素以及地塞米松给药治疗3/8天

后，ELISA法检测各组小鼠血清中IL-1β、TNF-ɑ、IFN-γ水平变化。

7.ELISA法检测RAW264.7细胞中，瑞香素对LPS作用下ROS水平变化的

影响。

8.流式细胞术检测RAW264.7细胞中，瑞香素对LPS作用下M1极化标志

分子CD80、CD86水平变化的影响。

9.qPCR法检测瑞香素对于巨噬细胞M1基因标志物TNF-ɑ、IL-6、CD80、

CD86表达的影响

10.WesternBlot法检测瑞香素对LPS处理的RAW264.7