时间分辨免疫荧光层析法检测总IgE的研究.pdfVIP

摘要

近年来，由于抗生素滥用和环境污染等多重因素，过敏性疾病的发病率日益升高，

由于过敏反应在临床上的症状与其他几种疾病相似度很高，导致临床上对过敏性疾病

的诊断难度加大，于是建立一种能快速、大量且准确的检测方法成为临床检验的重点。

时间分辨免疫荧光层析技术利用抗原抗体特异性结合的原理，不仅具有高灵敏度，高

通量等优点，并且检测仪器价格低廉，便于携带，预处理简单，更适用于临床检测。

本论文聚焦于建立一种准确灵敏的时间分辨免疫荧光检测总免疫球蛋白E（Total

ImmunoglobulinE）的方法，希望能够为临床检测总IgE提供一种可行方案。

（1）基于时间分辨免疫荧光层析的原理建立一种用于检测总IgE的方法，通过

对原材料抗原效价的筛选、微球标记方法的摸索等一系列建造方法的调控确定了几个

重要工艺的条件，最终鸡IgY抗体的最佳标记工艺为，标记浓度5μg/mL，pH8.0，标

记3h，封闭16h。抗总IgE抗体-1的最佳标记条件为，标记浓度10μg/mL，pH8.0，

标记时间3h，封闭16h。另外质控线抗体的包被浓度为2mg/mL，检测线抗体的包

被浓度为2mg/mL。根据最终的工艺条件最终成功制备了用于检测总IgE的时间分辨

免疫荧光层析技术。

（2）对建立的方法进行了阳性判断值和参考区间的确定，并且对来自医院的30

份非过敏患者的血清阴性样本和30份过敏患者的阳性血清样本分别进行了检测，检

测结果均符合要求。另外稳定性的研究结果表明，该试剂在常温储存12个月仍可继

续使用。

（3）建立的检测方法不仅与其他干扰物质如血红蛋白、胆红素、甘油三脂、胆固

醇没有交叉反应，且一些常见的用于治疗免疫疾病的药物也不会对结果产生干扰。且

本研究试剂与电化学发光方法检测样本结果对比，本研究试剂95%的检测结果与对比

试剂的检测结果的比值均在一致性范围内，且两种检测方法的相关系数

2

R=0.98060.975，两种方法具有极高的一致性。

因此，我们成功建立了一种能够快速灵敏检测总IgE的方法，且能够满足临床大

量检测的需求。这一方法的建立将为过敏性疾病的诊断提供一种更为快速的检测辅助

手段。

关键词：免疫检测技术；时间分辨免疫荧光层析；过敏性疾病；总IgE

ABSTRACT

Inrecentyears,theincidenceofallergicdiseaseshasbeenincreasingduetomultiple

factorssuchasantibioticabuseandenvironmentalpollution.Asthesymptomsofallergic

reactionsareclinicallysimilartootherdiseases,ithasbecomemoredifficulttodiagnose

allergicdiseasesclinically.Therefore,theestablishmentofarapid,highvolumeandaccurate

detectionmethodhasbecomethefocusofclinicaltesting.Time-resolved

immunofluorescencechromatography,whichutilizestheprincipleofantigen-antibody

specificbinding,isnotonlyhighlysensitiveandhighthroughput,butalsoinexpensive,

portableandeasytopre-treat,makingitmoresuitableforclinicaltesting.Thisthesisfocuses

onthedevelopmentofana