食源性致病菌特征肽的挖掘与其检测应用.pdfVIP

摘要

食源性致病菌可以通过污染食物引起多种食源性疾病，如感染、腹泻和中毒等，

时至今日仍然不断威胁着人类健康。因此，高效严谨的检验检疫手段，对于食源性

致病菌危害的控制极其重要。食源性致病菌的现有检测技术，如传统的生化鉴定方

法，以及现代的酶联免疫吸附法、PCR检测法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质

谱法等，虽然各有优点，但是都存在一定不足，开发新型检测技术依然具有着重要

意义。为此，我们提出了一种新的食源性致病菌检测策略，将致病菌的检测转化为

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对其特征肽的检测，后者通过液相色谱串联质谱联用技术的靶向分析实现。该策略

的关键是，挖掘筛选获得到对特定致病菌特异性良好的易于检测的组合特征肽。本

研究针对沙门氏菌和致泻性大肠埃希氏菌，通过基于实验或生物信息学的筛选方法，

分别挖掘了其候选特征肽，建立了基于组合特征肽的检测方法，并在奶粉食源性致

病菌的检测中进行了应用。

（1）筛选挖掘了沙门氏菌的候选特征肽。通过24株沙门氏菌与5株阪崎肠杆

菌、5株大肠埃希氏菌的比较蛋白组学分析，获得了94条沙门氏菌的候选肽；进一

步通过与阪崎肠杆菌和大肠埃希氏菌的虚拟消化库对比，筛选了48条候选肽；通过

PCA主成分分析，确定了8条候选肽，能够显著区分沙门氏菌、阪崎肠杆菌和大肠

埃希氏菌；最终通过基于Swissprot蛋白数据库和生物信息学的特异性评估，从中筛

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选了条候选特征肽。

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（）筛选挖掘了致泻性大肠埃希氏菌的候选特征肽。通过株大肠埃希氏菌、

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株阪崎肠杆菌和株沙门氏菌的比较蛋白质组学分析，获得了条大肠埃希氏

菌的候选肽；进一步通过与阪崎肠杆菌和沙门氏菌的虚拟消化库对比，筛选了50

PCA9

条候选肽；通过主成分分析，确定了条能够与沙门氏菌、阪崎肠杆菌显著区

分的大肠埃希氏菌的候选肽；通过基于Swissprot蛋白数据库和生物信息学的特异性

评估，从中筛选了4条大肠埃希氏菌的候选特征肽。另外，针对5种致泻性大肠埃

希氏菌，通过特征基因获得其特征蛋白序列，然后通过预测软件筛选特其酶切效率

和质谱效应较好的候选肽，最终通过生物信息学特异性评估筛选获得35条致泻性大

肠埃希氏菌的候选特征肽。

（3）建立了沙门氏菌候选特征肽基于MRM的靶向分析方法；通过对29株沙

门氏菌样品中候选特征肽的靶向检测，基于其响应强度及稳定性，进一步优选了3

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种候选特征肽；通过对份添加有不同沙门氏菌的奶粉样品进行检测，验证了

种特征肽的有效性和可靠性。考察了特征肽响应强度与沙门氏菌浓度的关系，两者

存在一定的线性关系，表明基于特征肽的靶向分析方法可以实现沙门氏菌的定量检

测。

4

（）确定了奶粉样品中致病菌的检测流程，综合前期实验室已经建立的阪崎肠

杆菌特征肽检测方法，成功实现了奶粉样品中痕量沙门氏菌和阪崎肠杆菌的检测，

最终建立了基于组合特征肽检测奶粉中多种致病菌的检测方法。

本研究探索的基于特征肽的靶向分析检测食源性致病菌的方法，不依赖于菌落

分离和繁琐的生化鉴定，具有检测时间短、人为因素影响小和检测可靠性高等优势。

该方法可以有效弥补现有方法的不足，对于推动食源性致病菌的卫生防控具有重要

意义。

关键词：沙门氏菌；致泻性大肠埃希氏菌；特征肽

ABSTRACT

Food-bornepathogenscancauseavarietyoffood-bornediseasessuchasinfections,

diarrhoeaandpoisoningbycontaminatingfoodandarestillaconstantthreattohuman

hea