天津大学《科学仪器》课件4.1 拉曼光谱与单细胞分析.pptxVIP

第四章

拉曼光谱与单细胞分析4.1拉曼光谱基础4.2拉曼光谱仪结构4.3激光光镊技术4.4单细胞拉曼光镊22:39:37Ramanspectroscopyandsinglecellanalysis现代科学仪器

4.1拉曼光谱基础22:39:371.分子振动与模式NH3stretchedvibrationCO2bendingvibration

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谐振子近似与虎克定律：f=-k?rf：弹簧的恢复力；k：力常数；?r=r-r0：平衡位置的位移2.分子振动理论1)经典模型

22:39:37?：折合质量，?=m1m2/(m1+m2)。系统的势能函数E和动能函数T分别为：质点系统的运动方程为：其解为：谐振子的机械振动频率ν或波数σ及力常数k为：

22:39:372)量子力学模型由量子力学理论，谐振子的能量不能连续任意取值(量子化)，该体系不含时间变量的薛定谔方程：解得系统能量为：?=0，1，2，3…(?：振动量子数)。将经典力学式代入得

22:39:37某些键的伸缩力常数（N·cm-1）键类型—C?C——C=C——C—C—力常数15?179.5?9.94.5?5.6化学键键强越强（即键的力常数k越大）原子折合质量越小，化学键的振动频率越大。

谐振子模型应用于真实分子时应加以修正：xe和ye：为非谐振性校正系数v：为特征振动频率。3)非谐振子修正

22:39:373.拉曼散射Rayleigh散射：弹性碰撞：无能量交换，仅改变方向。Raman散射：非弹性碰撞：方向改变且有能量交换。Rayleigh散射Raman散射h??E0E1υ=1υ=0h?0h?0h?0h?0+??E1+h?0E0+h?0h(?0-??)激发虚态

22:39:37经典类比m1m2m1v1v’1=v1m1m2m1v1v’1v1碰撞前碰撞后弹性碰撞非弹性碰撞

22:39:37Raman位移Raman散射的两种跃迁能量差：?E=h(?0-??)产生stokes线；强；基态分子多。?E=h(?0+??)产生反stokes线；弱。Raman位移：Raman散射光与入射光频率差??。

22:39:371.选择定律

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22:39:37对称中心分子CO2，CS2等，选律不相容。无对称中心分子（例如SO2等），三种振动既是红外活性振动，又是拉曼活性振动。?1?2?3?4拉曼活性红外活性红外活性拉曼光谱—源于极化率变化红外光谱—源于偶极矩变化

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22:39:37Raman位移：(1)对不同物质：??不同。(2)对同一物质：??与入射光频率无关；表征分子振-转能级的特征物理量；定性与结构分析的依据；分子振-转光谱；与红外光谱互补。2.Raman位移与散射强度散射强度:

22:39:373.共振拉曼

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22:39:374.表面增强拉曼

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22:39:374.2拉曼光谱仪结构Challengestorecord(good)spectraSeparateinelasticallyscatteredfromRayleigh(99.99999%)lightCollectthemaximumnumberofinelasticallyscatteredphotons老式光谱仪：

现代光谱仪：

22:39:371.激发光源-激光器1928年发现Raman散射现象，1962年HeNe激光器发明后出现首台拉曼光谱仪激光器用于Raman的优点：光强高、方向性好，易于被聚焦从而获得较强的激发强度线宽窄、单色性好，可实现较高的光谱分辨率，从而有效区分不同的分子结构

22:39:37激光器的选择原则1)波长考虑：散射强度荧光背景

22:39:37探测器量子效率空间分辨率d=1.22λ/NA

22:39:37UV:理论上deep-UV信号强，并且可有效避免荧光背景，但是紫外激光器一般功率低，并且光谱分辨率不高，此外紫外区探测器成本高780/785nm:在激光器输出功率、探测器效率和荧光背景方面有比较好的平衡。

22:39:37频率稳定的窄线宽激光器可获得高光谱