广州医科大学《分子生物学》 大题背诵.pdfVIP

简述随机引物法标记DNA探针的基本原理

①加入变性剂，使双链DNA打开；

②加入引物（6~8个核苷酸），与打开DNA链结合

③加入同位素标记的核苷酸、DNA聚合酶Ⅰ，使之在引物的3’末端沿5’-3’按碱基互补配对

的原则合成新的DNA链

④新合成的核苷酸链与旧核苷酸链完全相同，不同的是由同位素标记的核苷酸代替了无标记

的核苷酸

何谓核酸分子杂交？简述其基本原理

核酸分子杂交：利用变性作用将DNA双链分开，加入不同来源的DNA单链或RNA链，经

过退火处理，不同来源的两条多核苷酸链依靠碱基互补关系形成杂化双螺旋的过程

基本原理：在某些理化因素作用下，核酸分子双链碱基对的氢键断裂，疏水作用被破坏，有

规则地空间结构被破坏，形成单链分子，加入不同来源地DNA单链或RNA链，经过退火处

理，不同来源的两条多核苷酸链依靠碱基互补配对形成杂化双螺旋地过程。

核酸探针有哪些种类？简述两种最常用地核酸探针的制备方法。

种类：基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针、cRNA探针、寡核苷酸探针

基因组DNA探针的制备：从基因文库中选取某一特定基因片段后大量扩增，纯化，酶切得

到。

寡核苷酸探针的制备：根据已知的核酸序列先设计一个20~50个碱基的核苷酸顺序，在DNA

合成仪上合成得到

生物芯片按用途不同分为哪几类？两者之间有何区别？

信息芯片：通过将生命信息相关的信息分子高度集成，来实现对基因、蛋白等生物活性物质

进行高通量的检测与分析。

功能芯片：通过在芯片上完成生命科学研究中样品的分离、扩增、生化反应等功能

简述基因芯片的工作原理、制备、优点、临床应用

工作原理：核酸分子杂交

制备步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应及信号检测、结果分析

优点：高度的灵敏性和准确性、快速简便、可同时检测多种疾病

临床应用：产前遗传性疾病检查

简述PCR的基本原理和步骤、特点

基本原理为变性、退火、延伸。

①变性：将反应体系升温至95摄氏度，样品中双链DNA揭开为两条单链，各自作为模板。

②退火：将温度降至引物的Tm值以下（55摄氏度左右），5’端和3’端的引物各自与两条单

链DNA模板的互补区域结合。

③延伸：将温度升高至75摄氏度，耐热的TaqDNA聚合酶催化四种dNTP，从引物的3’-

OH端开始，依据模板碱基序列互补方式依次聚合，形成一条互补的DNA链

特点：高度的敏感性和特异性、适用样品的广泛性、操作简便快捷

PCRDNA复制

部位DNA体外合成放大过程生物体内DNA合成

引物DNA引物（作为新链的一部分）RNA引物（复制终止时被切除）

催化酶Taq聚合酶DNA聚合酶

有5‘端→3’端核酸外切酶有5‘端→3’端核酸外切酶

无3’端→5‘端核酸外切酶有3’端→5‘端核酸外切酶

基本过程每循环一次包括变性、退火、延伸复制起始、链延伸、终止

反应实质扩增靶DNA合成子代DNA

用于基因重组的载体需要具备哪些条件？

①具有自主复制能力

②具有较多拷贝数

③分子质量相对较小

④具备多个单一限制性内切酶位点

⑤有一个或多个筛选标记

⑥具有较高的遗传稳定性

用于基因重组的受体细胞需要具备哪些条件？

①易于接纳重组DNA的导入

②对载体的复制、扩增和表达无严格限制

③不存在特异性降解外源DNA的酶

④不对外源DNA进行修饰

⑤能表达重组体分子所提供的某种表型特征

基因工程中重组体筛选与鉴定的方法有：

（1）根据重组载体的遗传表型进行筛选

①载体的抗药性

②载体的抗药性标记失活

③β-半乳糖苷酶显色反应

④插入的外源基因性状

（2）限制性核酸内切酶酶切鉴定

（3）核酸分子杂交法

（4）PCR法