【丁酸乙酯合成的探究进展文献综述2100字】 .pdfVIP

丁酸乙酯合成的研究进展文献综述

1.1梭菌中产丁酰辅酶A的研究进展

生产白酒时我们常常使用泥窖进行发酵，而泥窖中含有丰富的厌氧梭菌，丁酰辅

酶A的合成途径就存在于这些梭菌之中。其中，研究较多的是丙酮丁醇梭菌和克氏梭

状芽胞杆菌的丁酰辅酶A合成途径。如图1-1,目前已经研究出较为清晰的代谢途径

为：乙酰辅酶A先经硫解酶（Thl）催化生成乙酰辅酶A,乙酰辅酶A再经三基丁酰

辅酶A脱氢酶（Hbd）催化生成3-基丁酰辅酶A,3-基丁酰辅酶A经三基丁酰

辅酶A脱水酶（Crt）催化生成丁烯酰辅酶A,丁烯酰辅酶A再经丁酰辅酶A脱氢酶

（Bed）催化生成丁酰辅酶A〔8-13]。

MalontybCoA

AcetoacetyKoA

[

3-(OH)butryKoA

ICrt

▼

CrotonoybCoA

IBed

▼

ButrykCoA

图1-1丁酸梭菌中丁酰CoA生物合成途径

对于丁酰辅酶A代谢途径的合成，较多学者选择研究巴豆酰辅酶A即丁烯酰辅酶

A到丁酰辅酶A这一步。DemmerJK等人证明催化巴豆酰辅酶A生成丁酰辅酶A的丁

酰辅酶A脱氢酶为一个电子复合体结构，该复合体是由三个亚基组成它们是：EtfA、

EtfB和Bed,其中，每个亚基又包含一个黄素蛋白作为辅基[14-15]oHroshSakurag等

人发现将丙酮丁醇梭菌的丁醇合成途径简单地引入酿酒酵胃时，1-丁醇的产量非常低。

而消除酵胃中甘油生产途径有助于提高1-丁醇的产量。此外，他们发现从巴豆酰辅酶

A到丁酰辅酶A是该合成途径的限速步骤，同时，他们将原来催化该步骤的电子复合

体换为反式-2-丁烯酰辅酶A还原酶（Ter）。结果表明，在将催化该步骤的电子复合体

换为反式-2-丁烯酰辅酶A还原酶并于适当条件培养48/J时后，正丁醇的产量可以达到

14.1mg/L[16]o

1.2丁酸乙酯合成途径的构建

VrgnaSchadeweg等人的研究表明工程酵胃中通过梭菌乙酰辅酶A衍生途径生产

正丁醇这一过程受到辅酶A（CoA）和胞质乙酰辅酶A的限制。增加它们的水平可以

使菌株在厌氧条件下产生高达130mg/L的正丁醇。而在有氧条件下，由于更有效的

NADH再氧化，该菌株甚至可以产生高达235mg/L的正丁醇。因此，他们将梭菌中产

正丁醇的代谢途径引入酿酒酵胃之中，并通过进一步优化乙酰辅酶A的合成路径、

NADH的水平使得工程酵胃细胞产生的正丁醇产量可以提高到之前从未达到的水平。

同时，他们通过过表达产正丁醇的酵胃菌株中正丁醇合成途径中的每一种酶，证明反

式-2-丁烯酰辅酶A还原酶(Ter)限制了正丁醇的产生。Ter的额外过表达可以使酵胃菌

株产生高达0.86g/L的正丁醇］。

NaoyaKataoka等人通过修改先前报道的1-丁醇合成途径，构建了一种新的可以在

大肠杆菌有氧生长条件下起作用的丁酸合成途径。该途包括该途径包括来自欧氏雷斯

顿菌(Ralstonaeutropha)的phaA(乙酰基转移酶)和phaB(依赖NADPH的乙酰辅

酶A还原酶)，来自豚鼠气单胞菌的phaJ((R)-特异性烯醇辅酶A水合酶)，来自

密螺旋体的Ter(反式-2-丁烯酰辅酶A还原酶)以及大肠杆菌中的内源性硫酯酶。通

过在迷你发酵罐中发酵培养，他们发现，改造后的菌株在最佳条件下，经过54小时的

分批补料培养后，产物丁酸盐浓度高达140mM(以丁酸计为1