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华北农学报２０２５ꎬ４０(１):２２—２８

大豆Ｐ３４蛋白基因启动子克隆及其调控活性分析

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桑莹莹ꎬ李珊珊ꎬ鲍薇ꎬ徐东ꎬ张雪ꎬ赵艳

(１.齐齐哈尔大学生命科学与农林学院ꎬ黑龙江齐齐哈尔１６１００６ꎻ２.吉林吉农高新技术发展股份有限公司ꎬ吉林公主岭１３６１００)

摘要:大豆Ｐ３４蛋白主要存在于种子中ꎬ其上游启动子很可能具有调控下游基因在种子中高表达的特性ꎮ为进

一步研究大豆Ｐ３４蛋白基因的组织表达模式及其启动子的调控活性ꎬ通过ｑＲＴ￣ＰＣＲ方法检测大豆Ｐ３４蛋白基因在大

豆不同组织中的表达情况ꎻ克隆大豆Ｐ３４蛋白基因５′端上游序列(ＧｍＰ３４Ｐ)ꎬ生物信息学分析其转录起始位点和顺式

元件ꎻ构建表达载体ꎬ利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草ꎬ检测转基因烟草中ＧＵＳ的表达ꎮ结果表明ꎬＰ３４蛋白基因

在大豆种子中的表达量极显著高于根、茎、叶和花的表达量ꎻ克隆获得ＧｍＰ３４Ｐ序列长度为１３８０ｂｐꎬ预测分析表明ꎬ

该序列的转录起始位点为第１３４２位上的碱基Ａꎬ序列中含有多种与种子高表达相关的顺式作用元件ꎬ如ＲＹｅｌｅｍｅｎｔ、

Ｓｋｎ￣１ｍｏｔｉｆ、２Ｓｓｅｅｄｐｒｏｔｂａｎａｐａ等ꎻ获得含有ＧｍＰ３４Ｐ启动子驱动ＧＵＳ基因的植物表达载体ｐＣＡＭ￣ＧｍＰ３４Ｐꎻ通过潮霉

素、ＰＣＲ及ＲＴ￣ＰＣＲ筛选阳性转基因植株ꎻ对ｐＣＡＭ￣ＧｍＰ３４Ｐ阳性转基因烟草植株ꎬ进行ｑＲＴ￣ＰＣＲ检测ꎬ结果显示ꎬ相

对于其他组织ꎬＧＵＳ基因在转基因烟草种子中的表达量达到极显著差异ꎻＧＵＳ组织化学染色结果显示ꎬＧｍＰ３４Ｐ启动

子能够调控下游ＧＵＳ基因在种子中高表达ꎮ

关键词:大豆ꎻＰ３４蛋白ꎻ启动子ꎻ生物信息学分析ꎻ转基因烟草

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中图分类号:Ｓ５６５.０３ꎻＱ７８文献标识码:Ａ文章编号:１０００７０９１(２０２５)０１００２２０７

ｄｏｉ:１０.７６６８/ｈｂｎｘｂ

ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＡｃｔｉｖｉｔｙＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＳｏｙｂｅａｎＰ３４ＰｒｏｔｅｉｎＧｅｎｅＰｒｏｍｏｔｅｒ

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ＳＡＮＧＹｉｎｇｙｉｎｇꎬＬＩＳｈａｎｓｈａｎꎬＢＡＯＷｅｉꎬＸＵＤｏｎｇꎬＺＨＡＮＧＸｕｅꎬＺＨＡＯＹａｎ

(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＡｇｒｏｆｏｒｅｓｔｒｙꎬＱｉｑｉｈａｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＱｉｑｉｈａｒ１６１００６ꎬＣｈｉｎａꎻ

２.ＪｉｌｉｎＪｉｎｏｎｇＨｉｇｈ￣ｔｅｃｈＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＧｏｎｇｚｈｕｌｉｎｇ１３６１００ꎬＣｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＳｏｙｂｅａｎＰ３４ｐｒｏｔｅｉｎｍａｉｎｌｙｅｘｉｓｔｓｉｎｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｓꎬａｎｄｉｔｓｕｐｓｔｒｅａｍｐｒｏｍｏｔｅｒｗａｓｌｉｋｅｌｙｔｏｒｅｇｕ￣

ｌａｔｅｔｈｅｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｇｅｎｅｓｉｎｓｅｅｄｓ.Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｔｈｅｔｉｓｓｕｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆ

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