非洲猪瘟病毒C129R蛋白与E165R蛋白的可溶性表达、胞外酶活力测定与结构预测分析.pdfVIP

·５２·ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ２０２４Ｖｏｌ５６Ｎｏ７

王彦伟，岳亚男，张素玲，等．非洲猪瘟病毒Ｃ１２９Ｒ蛋白与Ｅ１６５Ｒ蛋白的可溶性表达、胞外酶活力测定与结构预测分析［Ｊ］．畜牧与兽医，

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２０２４，５６（７）：５２５７．

ＷＡＮＧＹＷ，ＹＵＥＹＮ，ＺＨＡＮＧＳＬ，ｅｔａｌ．Ｓｏｌｕｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆＣ１２９ＲａｎｄＥ１６５ＲｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆＡｆｒｉｃａｎ

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ｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０２４，５６（７）：５２５７．

非洲猪瘟病毒Ｃ１２９Ｒ蛋白与Ｅ１６５Ｒ蛋白的可溶性表达、

胞外酶活力测定与结构预测分析

１，２＃１，２＃１，２１，２１，２

王彦伟，岳亚男，张素玲，李欢欢，陈赵媛，

１，２１，２∗１，２∗

刘月月，逄文强，田克恭

（１国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳４７１０００；２普莱柯生物工程股份有限公司，河南洛阳４７１０００）

摘要：Ｃ１２９Ｒ和Ｅ１６５Ｒ分别是非洲猪瘟病毒（ＡＳＦＶ）基因组编码的一种Ｍｎ依赖的超氧化物歧化酶和尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶，２种酶均

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参与ＡＳＦＶ的复制过程。通过研究ＡＳＦＶＣ１２９Ｒ蛋白与Ｅ１６５Ｒ蛋白的功能，以指导非洲猪瘟的诊断及免疫预防研究。对ＡＳＦＶＳＹ１８株的Ｃ１２９Ｒ

和Ｅ１６５Ｒ基因序列进行密码子优化后，利用大肠杆菌进行表达，纯化后获得重组蛋白，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其反应性，并对其胞外酶活力进行

测定，对Ｃ１２９Ｒ蛋白的结构预测结果进行分析。结果：实现了Ｃ１２９Ｒ蛋白与Ｅ１６５Ｒ蛋白的可溶性表达，重组蛋白分子量分别约为１５ｋＤａ和

１８ｋＤａ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示Ｃ１２９Ｒ与Ｅ１６５Ｒ蛋白均能与ＡＳＦＶ阳性血清产生特异性反应；胞外酶活力测定显示，Ｃ１２９Ｒ与Ｅ１６５Ｒ蛋白在胞外均有

酶学活性，比酶活力分别为（６０２±３８）Ｕ／ｍｇ和（３２６±２４）Ｕ／ｍｇ；蛋白质结构预测结果显示，Ｃ１２９Ｒ为双结构域蛋白，主要由Ｎ端α螺旋结

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构域和Ｃ末端α／β结构域组成，Ｃ１２９Ｒ蛋白Ｎ端α螺旋结构域和Ｃ末端α／β结构域的交界处可能是其主要活性位点，序列保守的β折叠桶

（Ｋ～Ａ）可能在其发挥功能时起重要作用。

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关键词：非洲猪瘟病毒；Ｃ１２９Ｒ蛋白；Ｅ１６５Ｒ蛋白；可溶性表达；酶学活性；结构预测

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中图分类号：Ｓ８５２６５文献标志码：Ａ文章编号：０５２９５１３０（２０２４）０７００５２０６