2026年三维设计一轮高中总复习生物学生用-第58讲　基因工程的基本工具和基本操作程序.docxVIP

第58讲基因工程的基本工具和基本操作程序

课程标准

1.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。

2.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。

3.DNA的粗提取与鉴定实验。

4.利用聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。

考点一基因工程的基本工具

1.基因工程的概念

提醒基因工程的理论基础

2.基因工程的基本工具

（1）限制性内切核酸酶（简称限制酶）

提醒①将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，同时产生四个黏性末端或平末端。

②原核生物的限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

（2）DNA连接酶

【教材拾遗】（选择性必修3P72旁栏思考）DNA连接酶和DNA聚合酶不是一回事。原因是①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。

（3）基因进入受体细胞的载体

1.（选择性必修3P71正文）切割质粒的限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核苷酸序列。（）

2.（选择性必修3P71正文）限制酶在识别序列中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开形成的是黏性末端，在识别序列中心轴线处切开形成的是平末端。（）

3.（选择性必修3P71正文）E.coliDNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。（）

4.（选择性必修3P71～72正文）基因工程中用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶、载体。（）

5.（选择性必修3P72正文）质粒上标记基因的存在，是便于重组DNA分子的筛选。（）

1.（2024·江西上饶期末）基因工程是在DNA分子水平上进行的操作，需要有专门的工具。下列关于基因工程所需基本工具的叙述，错误的是（）

A.用不同的限制酶分别切割含目的基因的DNA和质粒可能产生相同的末端

B.T4DNA连接酶可以催化磷酸二酯键形成进而连接黏性末端或平末端

C.作为载体的质粒上通常有抗生素合成基因作为标记基因，以便于重组DNA的筛选

D.原核细胞内的限制酶可切割入侵的DNA分子，通常不切割细菌自身的DNA分子

2.（2025·山东济南高三期末）下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是（）

A.DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合

B.用限制性内切核酸酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子

C.利用PCR仪扩增DNA分子时常用一种耐高温的DNA连接酶

D.在解离根尖分生区细胞时加入纤维素酶有利于提高解离的效果

题后归纳

与DNA有关的几种酶的比较

3.限制酶和DNA连接酶是基因工程的工具酶，以下说法正确的是（）

A.限制酶只能切割双链DNA片段，不能切割烟草花叶病毒的核酸

B.DNA连接酶能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键

C.E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端，不能连接平末端

D.限制酶主要从原核生物中分离纯化而来，所以也能剪切自身的DNA

考点二基因工程的基本操作程序

1.目的基因的筛选与获取

（1）筛选合适的目的基因

①目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。主要是指的基因。

②筛选目的基因的方法

（2）利用PCR获取和扩增目的基因

提醒①在PCR过程中实际加入的原料为dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、dCTP），既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。②引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，作为新子链的合成起点，只能结合在母链的3端，使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸。

③复性温度过高，则引物难以与模板链结合；温度过低则易使两条母链配对结合，均无法获得PCR产物。④真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2＋。

2.基因表达载体的构建（核心）

提醒启动子、起始密码子、终止子、终止密码子的区别

3.将目的基因导入受体细胞

提醒①农杆菌转化法中的两次拼接和两次导入：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上，第二次拼接（非人工操作）是指插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞的染色体DNA上；两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入（非人工操作）是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。

②导入的目的基因，可能存在于细胞质中，也可能整合到染色体DNA上。存在于染