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JournalofTraditionalChineseVeterinaryMedicine2024年43卷第2期Vol.43No.22024

DOI:10.13823/ki.jtcvm.2024.015中图分类号：S852.6文献标识码：A文章编号：1000-6354(2024)02-0054-05

新种芽孢杆菌分离鉴定及抑菌活性分析

11，2112

谢志恒，余梦博，顾万军，周淑贞，马驿

（1.佛山市南海东方澳龙制药有限公司，广东佛山528234；2.广东海洋大学滨海农业学院动物医学系，

广东湛江524088）

摘要：芽孢杆菌具有较强的抵抗外界环境压力的能力，无毒副作用，是饲料益生菌添加剂菌种开

发的关注点。试验旨在寻找和探索作为饲料益生菌添加剂的新型芽孢杆菌菌种，进而研究芽孢杆菌分

离株的抑菌活性。采用加热分离方法，从养鱼池沉积物和乌龟池底泥分离出两株细菌，经形态学观察、

生化鉴定、16SrDNA序列比对并建立遗传进化树进行鉴定，再进行药敏试验及菌株抑菌性测定。结果

表明，分离的两株细菌均为芽孢杆菌新种，分别命名为芽孢杆菌spX102和芽孢杆菌spX901。两株分

离菌对7种常见药物均敏感，且对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌指示菌具有较强抑菌作用。说明分离的

两株芽孢杆菌新种可作为动物益生菌菌种进行开发。

关键词：芽孢杆菌；新种；分离鉴定；抑菌活性

芽孢杆菌（Bacillus）是一类好氧或兼性厌氧、革生菌菌种的开发应用及其抑菌代谢产物研究提供候

兰阳性、产芽孢的杆状细菌［1］。芽孢杆菌由于产生芽选菌株。

孢，具有较强的抵抗外界环境压力的能力，能够抵抗1材料与方法

干燥、热和紫外线辐射等［2］。芽孢杆菌种类繁多、数1.1材料

量庞大，是自然界中广泛存在的非致病性细菌，对自1.1.1样品来源采集养鱼池沉积物和乌龟池底泥

［3］［4］

然环境友好。鉴于芽孢杆菌的生物学特性，筛选样品。

芽孢杆菌菌株作为动物饲料益生菌添加剂具有广阔1.1.2指示菌大肠杆菌（K12D31）、金黄色葡萄球

的研究开发空间，特别是活菌制剂及其产物在动物菌（ATCC29213）来自中国微生物菌种保藏管理中心。

促生长和提高免疫力方面应用广泛，并在种养殖业1.1.3培养基及试剂LB液体培养基、LB琼脂培养

中具有一定的应用前景，例如生物化肥和生物农基、细菌生化反应试剂及药敏试纸片均购自广东环凯

药［5］。饲用益生素的研究与菌种开发是关键因素，研微生物科技有限公司。

究认为70%益生素菌种来自芽孢杆菌属［6-7］。目前，1.2方法

现有饲料添加剂中使用的芽孢杆菌有枯草芽孢杆1.2.1菌株分离分别取养鱼池沉淀物和乌龟池底

［8］［9］［10］

菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌等，具有耐高泥约1g于1.5mL离心管，4500r/min离心5min，将上

温、耐酸碱、耐压等优点［11］。本试验采用加热分离方清移到另一离心管中，95℃水浴加热5min，每份样品

法，从养鱼池沉积物和乌龟池底泥分离细菌，经纯化取200µL涂布LB琼脂平板，37℃培养24h，挑取芽孢

培养、革兰染色、生化鉴定和16SrDNA序列对比鉴杆菌疑是菌落，进一步纯化、分离鉴定。

定，应用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为指示菌，测1.2.2指示菌培养将金黄色葡萄球菌