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Bna.SMXL7基因调控油菜分枝数目的初步研究

摘要

油菜不仅是世界第二大油料作物，也是我国第一大油料作物，近几年，为了进一步

发展油菜产业、维护食用油供给安全和满足消费者的新需求，需最大限度地提高油菜作

物的应用潜力，油菜的分枝数目是保证油菜多功能开发与利用的其中一个重要基础。研

究油菜分枝数目调控的分子机制和创造多分枝的种质资源，为通过株型改良促进油菜的

多功能开发与利用提供重要的理论基础和遗传资源。植物的分枝性状受到多种外界因素

以及各类植物激素及其转录因子协同调控，其中独脚金内酯（strigolactones,SLs）就是

影响分枝性状的最重要一类激素，通过对水稻、拟南芥、豌豆以及矮牵牛等植物中的分

枝相关突变体的研究，同时结合反向遗传学研究，植物体内SL的生物合成及信号转导

途径已经被解析的比较清楚，植物体内的SL信号转导途径是由SCF复合体成员F-box

蛋白D3（DWARF3）/MAX2（MOREAXILLARYGROWTH2）/RMS4（RAMOSUS4）

/PhMAX2、编码α/β水解酶的SL受体D14/AtD14/RMS3/DAD2（DECREASEDAPICAL

DOMINANCE2）以及转录抑制因子D53/SMXLs（SUPPRESSOROFMAX2-LIKEs）等

三类蛋白介导，调控SL下游的早期响应基因表达，SL信号转导途径的相关蛋白在植物

分枝发育等生长过程中具有重要的调控作用。

但是，目前SMXLs基因在油菜中的生物学功能及其调控油菜分枝的分子网络尚不

明确，本项目拟通过分子生物学结合反向遗传学手段，初步阐述Bna.SMXL7在油菜分

枝形成中的作用机制及调控网络，主要研究结果如下：

1.通过Bna.SMXL7的逆转录定量PCR（RT-qPCR）、亚细胞定位、拟南芥原生质

体瞬时表达以及萤火虫荧光素酶互补等实验表明，Bna.SMXL7参与了油菜独脚金内酯

（SL）的信号途径介导的细胞核内的基因表达调控。

2.通过体外酵母双杂交以及pull-down实验和体内萤火虫荧光素酶互补实验共同

表明，油菜Bna.SMXL7能够与与转录共抑制因子Bna.TPL互作，进一步说明，

Bna.SMXL7能够在油菜独脚金内酯（SL）信号中起到阻遏作用。

3.通过体外酵母双杂交以及pull-down实验和体内萤火虫荧光素酶互补实验共同

表明，油菜中Bna.SMXL7与Bna.SPL9存在相互作用。

4.通过酵母单杂交以及化学发光法（EMSA）共同表明Bna.SPL9模块可以直接作

用于BnaA1.BRC1的启动子。

5.为了进一步验证以上的分子调控通路，我们通过油菜遗传转化结合体外定点突

变和CRISPR技术分别构建了以Westar为遗传背景的多种不同类型的功能获得性突变体

Bna.SMXL7-D以及标签融合的过表达转基因材料BnaA5.SPL9r-HA-OE和

BnaA1.BRC1-Flag-OE，为后期的分枝数目相关表型考察和遗传互作验证建立了很好的

材料基础。

【关键词】：Bna.SMXL7；独脚金内酯；分枝数目；油菜

PreliminaryresearchofBna.SMXL7controlling

thebranchnumberinBrassicanapusL.

Abstract

Rapeseed(BrassicanapusL.)isnotonlythesecondlargestoilcropintheworld,but

alsothelargestoilcropinChina.Inrecentyears,inordertofurtherdeveloptherapeseed

industry,maintainthesecurityofedibleoils